引言
抗氧化剂即为防止或延缓饲料中某些活性成分发生氧化
变质而添加于饲料中的制剂。主要用于含有高脂肪的饲
料，以防止脂肪氧化酸败变质，也常用于含维生素的预
混料中，它可防止维生素的氧化失效。我国《食品添加
剂使用卫生标准》（GB2760—1996）中规定：丁基羟基茴
香醚可用于食用油脂、油炸食品、干鱼制品、饼干、方
便面、速煮米、果仁罐头、腌腊肉制品、早餐谷类食品，
其zui大使用量为 0.2g/kg。丁基羟基茴香醚与二丁基羟基
甲苯、没食子酸丙酯混合使用时，其中丁基羟基茴香醚
与二丁基羟基甲苯总量不得超过 0.1 g/kg，没食子酸丙酯
不得超过 0.05 g/kg（使用量均以脂肪计）。此外也可用
于胶姆糖配料。目前饲料中的抗氧化剂的测定方法主要有液相色谱
法 [1]、气相色谱法 [2] 等。相关国家标准方法为 GB/T 17814-
2011 饲料中丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯
（BHT）、乙氧喹 (EQ) 和没食子酸丙酯（PG）的测定。由
于没食子酸丙酯的化学性质决定了该物质不适用于气相
色谱法测定，故该标准中未将 PG 列入气相色谱法的检测
项目中。本方法依据该标准方法，开发了饲料中的三种
抗氧化剂的同时测定的方法，对前处理方法做了少许改
动，以增强该方法的适用性。
仪器
Trace1310气相色谱仪，配FID检测器（Thermo Scientific）；
AS1310 自动进样器（Thermo Scientific）
离心机、天平、漩涡混合器（Thermo Scientific）
耗材
色谱柱：TG-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）（Thermo
Scientific, PN 26098-1420）
C18 吸附剂：40-60 µm。（Thermo Scientific）
试剂与标准品
丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、乙氧喹标准品：含
量≥ 99%；
乙腈、正己烷：色谱纯 (Thermofisher)；氯化钠，分析纯
标准溶液的制备
储备液：准确称取 10.0mg 丁基羟基茴香醚、二丁基羟基
甲苯、乙氧喹标准品，分别用正己烷溶解稀释并定容至
10mL，得到 1000mg/L 标准储备液，储存在冰箱中备用。
标准中间液：上述储备液分别移取 1mL，用正己烷稀释
定容至 100mL，得浓度为 10mg/L 的混合标准中间液。
样品前处理
准确称取粉碎后的饲料样品 1.0g，加 7mL 水浸泡，再加
10mL 乙腈和 1.0gNaCl，振荡提取 3min，然后以 10000rpm
的速度冷冻离心，离心后取上清液 2mL 加 C18 吸附剂和
无水硫酸镁各100mg，振荡后过0.22µm滤膜后上机分析。
实验条件
色谱柱：TG-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；
柱温：50℃（1 min），20℃ /min 到 250℃（5 min）；
进样模式：分流进样，分流比：20:1，进样量：1 µL；进样口温度：250℃；
载气：高纯氮气（99.999%），恒流模式，1.2 mL/min；
检测器温度：250℃，氢气 35mL/min，空气 350mL/min，尾
吹气氮气 40mL/min。
结果与讨论
色谱柱的选择：分别用极性不同的 TG-WAX（30 m
×0.25 mm×0.25 μm）和 TG-5（30 m×0.25 mm×0.25 μm）
两根色谱柱对所测三种物质进行分离，结果表明 TG-WAX
柱对 BHA 和 EQ 的分离效果较差，不能达到基线分离，而
TG-5 色谱柱对三种物质能够达到有效分离（见图 1）。所
以选用TG-5色谱柱作为本实验中使用的色谱柱。
提取溶剂的选择：分别用极性溶剂（乙腈）和非极性溶
剂（正己烷）来提取饲料中的抗氧化剂，比较提取的效率。
结果表明，乙腈对这三种抗氧化剂的提取效率要高于正
己烷的提取，提取液进样用气相色谱仪分析（图 2），可
看出，正己烷提取液含杂质也较多，对分析物的测定有
一定干扰，而乙腈提取液相对洁净。因此在本实验中选
取乙腈为提取溶剂。净化方法的选择：按照标准方法中，提取液过弗罗里硅
土柱净化，二氯甲烷-丙酮混合溶剂洗脱，BHT回收率极低。
考虑到乙腈提取液杂质并不多，因此放弃固相萃取小柱
净化的方法，采用分散固相萃取的方法净化，向提取液
中加入C18吸附剂振荡除杂，操作简单，目标物无损失。
线性关系及测定低限：准确移取适量抗氧化剂混合标准
中间液，分别用正己烷稀释配制得到浓度为0.1、0.5、1、2、
5 mg/L 的标准工作液，供气相色谱质谱测定。以测定峰面
积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准
曲线如图 3。方法检出限以 3 倍信噪比计算得到，本方法
测定饲料中的 3 种抗氧化剂的检出限为1mg/kg。
回收率及精密度实验：用标准添加法，在饲料样品中，添
加抗氧化剂混合标准溶液，做加标回收实验，按上述方法
进行提取、净化和测定，饲料样品添加浓度为 3mg/kg 和
30mg/kg两个水平，各做3个平行，样品、添加谱图见图4，
结果见表 1。
结论
饲料中的抗氧化剂经乙腈提取，分散固相萃取的方法
净化，采用赛默飞世尔新型气相色谱仪进行检测。结
果表明该方法操作简单，提取效率高，回收率和重现
性均能满足实验室日常检测的要求。
