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生物分子类实验室常用实验技术原理汇总-4

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2014/12/8 9:31:13

九、RT-PCR

RT-PCR是将RNA的反转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA,再以cDNA为模板,扩增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或两步法的形式进行。在两步法RT-PCR中,每一步都在*条件下进行。

实验步骤:

1、RNA的提取;

2、反转录合成cDNA;

3、PCR扩增;

4、产物的电泳和结果的测定。

十、实时荧光定量PCR(Q—PCR)(Real-time Quantitative PCR )

利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。

阈值:是循环开始3~15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍,设定在扩增曲线指数增长期

C(t)值:荧光信号(扩增产物)到达阈值时所经过的扩增循环次数

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