PPA制备与使用的基本技术

PPA制备与使用的基本技术

• 将初步纯化的SPA与HRP用过碘酸钠氧化法（交联反应时间在22℃下5h）交联。
• 将上述PPA溶液过Sephadex G-100柱，条件同前。所收集的第1管至第22管的合并液，是PPA存在的主要组分，可用ELISA塑料平板法检测活性。将合并液浓缩，然后加入30%左右甘油，贮于4℃冰箱备用

     PPA的使用

• PPA-ELISA法。基本上与ELISA法相同，PPA代替了酶标抗抗体。在进行微量反应板测定时，PPA常常加入0.1ml,稀释度一般在1：2至1：100（应按不同情况试验）。PPA与IgG是化学共价结合，反应时间不宜过长，不应超过2h，控制在30min-60min,反应时间过长会使PPA吸附到塑料载体上去。
• 用PPA进行组织内有关抗原的定位。甲醛对PPA有显色影响，因此组织不可用甲醛固定，可用甲醛、乙醇等。PPA对组织内抗原（先与IgG结合）的定位，反应时间可以延长，便于渗透入组织细胞内，且没发现严重的物理吸附现象。
• 在PPA实验中稀释液常用含0.5%（v/v）Tween20的0.02mol/L Ph 7.4 Tris-HC1缓冲液（2.42gTris溶于蒸馏水后用0.1N HC1调pH至7.4，然后加蒸馏水定容至1000ml,zui后加0.5ml Tween 20）。
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