技术文章

大鼠NADPH氧化酶elisa试剂盒使用说明书

上海雅浦生物科技有限公司

2014/12/31 8:36:37

大鼠NADPH氧化酶(NADPH-OX)酶联免疫检测

试剂盒使用说明书

 

使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于生物素双抗体夹心技术原理,来检测大鼠NADPH氧化酶(NADPH-OX)),只能用于研究用途,不得用于医学诊断。

 

用    途: 用于大鼠血清、血浆及相关液体样本中NADPH氧化酶(NADPH-OX)的测定。

工作原理

本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中大鼠NADPH氧化酶(NADPH-OX)的水平。向预先包被了大鼠NADPH氧化酶(NADPH-OX)单克隆抗体的酶标孔中加入NADPH氧化酶(NADPH-OX),温育;温育后,加入生物素标记的抗NADPH-OX抗体,再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,再经过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物A、B,产生蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅与样品中大鼠NADPH氧化酶(NADPH-OX)的浓度呈正相关。

试剂盒组成

1

标准品(3200pg/ml)

0.5ml

7

显色剂A液

3ml

2

标准品稀释液

3ml

8

显色剂B液

3ml

3

酶标包被板

12孔×4条

9

终止液

3ml

4

链霉亲和素-HRP

3ml

10

说明书

1份

5

20倍浓缩洗涤液

20ml

11

封板膜

2张

6

生物素标记的抗- NADPH-OX抗体

1ml

12

密封袋

1个

需要而未提供的试剂和器材

1.37℃恒温箱。

2. 标准规格酶标仪。

3. 精密移液器及一次性吸头

4. 蒸馏水,

5. 一次性试管

6. 吸水纸

注意事项

1. 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。

3. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

4. 为避免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和封板膜。

5.  不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

6.  底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。根据需要,重复此过程数次。

自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。


标本要求

1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

操作程序

1.  标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释):

160 pg/ml

(5号标准品)

120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液

800 pg/ml

(4号标准品)

120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液

400 pg/ml

(3号标准品)

120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液

200 pg/ml

(2号标准品)

120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液

100 pg/ml

(1号标准品)

120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液

2.  根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。

3.  加样:1)空白孔:空白对照孔不加样品,生物素标记的抗NADPH-OX抗体,链霉亲和素-HRP,只加显色剂A&B和终止液,其余各步操作相同;2)标准品孔:加入标准品50μl链霉素-HRP50μl(标准品中已事先整合好生物素抗体,故不加);3)待测样品孔:加入样本40μl,然后各加入- NADPH-OX抗体10μl链酶亲和素-HRP50μl,盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37℃温育60分钟。

4.  配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

5.  洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.  显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。

7.  终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8.  测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后10分钟以内进行。

9.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。

操作程序总结:

准备试剂,样品和标准品

 


加入准备好的样品和标准品,生物素标记二抗和酶标试剂,37℃反应60分钟


洗板5次,加入显色液A、B,37℃显色10分钟


加入终止液


10分钟之内读OD值


计算

 

检测范围:10 pg/ml→300pg/ml。

规格:    48T/盒

保存:    2-8℃

有效期:  6个月(2-8℃)。

相关产品

猜你喜欢

当前客户在线交流已关闭
请电话联系他 :