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植物钙调磷酸酶(CaN)ELISA试剂盒使用说明书

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2010/7/21 9:18:40

 

植物钙调磷酸酶(CaNELISA试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用      目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中钙调磷酸酶(CaN)含量。
实验原理:
  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物钙调磷酸酶(CaN)水平。用纯化的植物钙调磷酸酶(CaN)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入钙调磷酸酶(CaN)抗原,再与HRP标记的钙调磷酸酶(CaN)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的钙调磷酸酶(CaN)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物钙调磷酸酶(CaN)抗原浓度。
 
试剂盒组成

试剂盒组成
48孔配置
96孔配置
保存
说明书
1份
1份
 
封板膜
2片(48)
2片(96)
 
密封袋
1个
1个
 
酶标包被板
1×48
1×96
2-8保存
标准品:27U/L
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2-8保存
标准品稀释液
1.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
2-8保存
酶标试剂
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8保存
样品稀释液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8保存
显色剂A液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8保存
显色剂B液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8保存
终止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8保存
浓缩洗涤液
(20ml×20倍)×1瓶
(20ml×30倍)×1瓶
2-8保存

 
标本要求:
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
 
操作步骤:
1.         标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为18U/L ,12U/L,6U/L,3U/L,1.5U/L)。
2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.         配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.         温育:操作同3。
8.         洗涤:操作同5。
9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
 
注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
 
 
 
 
 
 
 
 
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,   
在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD     
值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释      
倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标      
准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值      
代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释      
倍数,即为样品的实际浓度。                  
 
                                             
 
(此图仅供参考)
 
 
 
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
 
 
检测范围:                                             
0.5U/L – 20U/L                                        
                           
保存条件及有效期:
1.试剂盒保存:;2-8
2.有效期:6个月
 
厦门慧嘉生物科技有限公司专业代理众多生命科学领域的。致力于各种ELISA试剂盒、免疫组化试剂盒、一抗二抗、细胞因子、生物试剂、移液器、耗材的销售推广及服务工作。
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