RIPA组织/细胞裂解液使用说明书
货号：R0010
规格：20ml/100ml
本产品配有一支PMSF（0.3ml/1.5ml）
保存：RIPA裂解液4℃保存，PMSF-20 ℃保存。
使用说明：
如发现RIPA有沉淀,请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
根据使用量，取每1mlRIPA加入10ul PMSF，使PMSF的终浓度为1mM。混匀备用（PMSF现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量) 。 用玻璃匀浆器匀浆，直充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事项：
本试剂为强烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，造成细胞裂解液粘稠，此时可以直接加入蛋白上样缓冲液，煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可入加少量SDS（1%），煮沸后离心测浓度。本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。
如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。
相关产品：
P1020 1×PBS，PH7.2-7.4，0.01M
P1016 4×蛋白上样缓冲液（含β-巯基乙醇）
S1010 10% SDS
PR1400 低分子量蛋白MARKER
PC002 BCA法蛋白浓度测定试剂盒
PC0030 Lowry法蛋白浓度测定试剂盒
