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猴补体3(C3)elisa试剂盒操作步骤

上海双赢生物科技有限公司

2015/3/30 13:25:25

猴补体3(C3)elisa试剂盒操作步骤

1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

800μg/ml  5 号标准品  150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液

400μg/ml  4 号标准品  150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

200μg/ml  3 号标准品  150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

100μg/ml  2 号标准品  150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

50μg/ml  1 号标准品  150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液

2.  加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 、标准孔、待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样 50μl, 待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品zui终稀释度为 5 倍) 。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.  温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.  配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.  洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

重复 5 次,拍干。

6.  加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。

7.  温育:操作同 3。

8.  洗涤:操作同 5。

9.  显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

10 分钟.

10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。

11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

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