上海双赢生物科技有限公司
2015/3/30 13:25:25猴补体3(C3)elisa试剂盒操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
800μg/ml 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
400μg/ml 4 号标准品 150μl 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
200μg/ml 3 号标准品 150μl 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
100μg/ml 2 号标准品 150μl 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
50μg/ml 1 号标准品 150μl 的 2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同) 、标准孔、待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样 50μl, 待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品zui终稀释度为 5 倍) 。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3。
8. 洗涤:操作同 5。
9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。