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2015/4/15 9:27:52液体培养基中谷氨酰胺的作用及使用方法
氨基酸谷氨酰胺是培养细胞的一种必需营养成分。水溶液中被液体培养基谷氨酰胺自发地分解成氨。很多实验中经常用到的方法,几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求,细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质,在缺少谷氨酰胺时,细胞生长不良而死亡。
所以,各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,应置-20 ?C冰冻保存,用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4 ?C 冰箱储存两周以上时,应重新加入原来量的谷氨酰胺。基础医学细胞中心在其服务项目中配制分装了高浓度(100倍)的谷氨酰胺溶液(1ml/支)。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培养基中,其终浓度为2mM/ml培养基。包装为粉红色,-24?C保存。
谷氨酰胺在细胞代谢过程中起重要作用,合成培养基中都要添加,由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定容易降解,4℃下放置7天即可分解约50%,所以都是在使用前添加配制好的培养液(含谷氨酰胺)在4℃放置2周以上时,要重新加入原来量的谷氨酰胺,故需单独配制谷氨酰胺,以便临时加入培养液内
使用终浓度为1-4mmol/L一般配制为100倍浓缩液,即浓度为200mmol/L(29.22g/L),配制方法为 :
谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml即配成200mmol/L的溶液,充分搅拌溶解后(应加温30℃),过滤除菌,分装小瓶,-20℃保存,使用时可向100ml培养液中加入0.5-2ml谷氨酰胺浓缩液,终浓度为1-4mmol/L
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