二氧化碳培养箱的气路由高浓度的二氧化碳钢瓶、气泵、稳压阀、针型阀，电磁阀、流量计及储气瓶等组成。(高浓度的二氧化碳钢瓶由用户自备)。
当输入一定压力的高浓度二氧化碳气体，通过调节阀、针阀及电磁阀的流量、时间控制，保证一定量的二氧化碳气体进入工作室，达到自动控制工作室内的二氧化碳浓度值。该值同时通过显示电路显示，便于观察了解。为方便用户在使用中进行浓度的监视和采样，在二氧化碳细胞培养箱的后背面装有采样、监视口。因采用了快慢速双重充气法，使二氧化碳培养箱在开、关门后，工作室内的二氧化碳浓度能快速恢复且无过冲现象。
在二氧化碳细胞培养箱工作过程中，由储气瓶对工作室内进行补气，二氧化碳记录仪记录数值，以保持稳定的二氧化碳浓度值。
CO2培养箱主要控制模拟活体内环境相关的3个基本变量：稳定的CO2水平、温度、相对湿度。要有稳定的培养环境，就要考虑这三方面的影响因素，选购时，就应该对这些“重中之重"有一定的了解才能选到适合自己的仪器。但是，其它的一些方面的“小"因素也不能忽略，因为这些都会影响仪器的使用价值和寿命。选购时，就应该从各方面的因素加以考虑。
