SuperRT逆转录酶（RNase H-）说明书
SuperRT Reverse Transcriptase
目录号：YJ0740
保存条件：-20℃保存。
组分说明
Cat. No. YJ0740 YJ0740A
Kit Size 25 100
SuperRT，200 U/μl 25 μl 100 μl
5×RT Buffer 120 μl 500 μl
本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途
产品简介
SuperRT逆转录酶是一种利用大肠杆菌工程菌进行重组与表达的全新逆转录
酶。与Moloney鼠白血病病毒来源的M-MLV和鸟成髓细胞病毒来源的 AMV不同，该酶
不具有RNase H活性，能够转录多种 RNA模板，可利用极低量的总RNA或mRNA
合成cDNA*链，起始样本量可低至pg级，zui大限度将RNA逆转录成cDNA*链。
SuperRT逆转录酶与RNA亲合能力强，能通读GC含量高，二级结构复杂的RNA模板，获
得高产量的cDNA。该酶耐热性及稳定性强，操作简单快速，可以合成 100bp-12kb的
cDNA。适用于*链cDNA的合成、RT-PCR、RT-qPCR以及全长cDNA文库的构建等。
活性定义
以Poly（A）为模板，oligo（dT）为引物，在 37℃条件下，10分钟内催化掺入 1
nmol的dTTP所需酶量定义为一个活性单位(U)。
质量控制
200 U的本酶和1 μg的16 S，23 S rRNA在37℃下反应1小时，RNA的电泳谱带不
发生变化。
注意事项
1．在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议在专门
的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经
常更换手套。
2．实验尽量使用一次性塑料器皿，若使用玻璃器皿，应使用0.1％DEPC（焦碳酸二乙
酯）水溶液在37℃处理12小时，并在120℃下高压灭菌30分钟后使用，或者将玻璃
器皿在180℃下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用 0.1%的DEPC
处理后进行高压灭菌。
3．本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心
后使用。所涉及的酶类使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4．若起始RNA的量小于50 ng，建议加入RNA酶抑制剂（RNasin）。本试剂盒并未提
供，如需要可单独向本公司订购，货号：YJ0596。
使用方法
注意：1 ng-5 μg总RNA可建立20 μl反应体系，如果总RNA量大于5 μg，请按比例扩大反应体系。i逆转录操作步骤：
1．将RNA模板、引物、dNTP Mix、RT Buffer、SuperRT和RNase-Free Water溶解并
置于冰上备用。
2．根据以下表格配制反应体系，总体积为20 μl。
试剂 20 μl反应体系 终浓度
dNTP Mix，2.5 mM Each 4 μl 500 μM Each
Oligo-dT Primer，100 μM
或 Random Primers，50 μM 1 μl
或 Specific Primer ,10 μM
RNA Template X μl 50 pg-5 μg
5×RT Buffer 4 μl 1×
SuperRT，200 U/μl 1 μl
RNase-Free Water up to 20 μl
注意：若起始RNA的量小于50 ng，则建议加入RNA酶抑制剂（RNasin）。本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：YJ0596。
3．涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
4．42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
5．逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存。
ii 若逆转录效率低，或RNA模板二级结构复杂、GC含量高时，建议采用以下步骤：
1．将RNA模板、引物、dNTP Mix、RT Buffer、SuperRT和RNase-Free Water溶解并
置于冰上备用。
2．根据以下表格配制反应体系，总体积为15 μl。
试剂 20 μl反应体系 终浓度
dNTP Mix，2.5 mM Each 4 μl 500 μM Each
Oligo-dT Primer，100 μM
或 Random Primers，50 μM 1 μl
或 Specific Primer ,10 μM
RNA Template X μl 50 pg-5 μg
RNase-Free Water up to 15 μl
3．70℃孵育10分钟，迅速冰浴2分钟。
4．短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
5．继续向以上反应液中加入以下试剂：
试剂 20 μl反应体系 终浓度
5×RT Buffer 4 μl 1×
注意：若起始RNA的量小于50 ng，则建议加入RNA酶抑制剂（RNasin）。本试剂盒并未提供，
如需要可单独向本公司订购，货号：YJ0596。
6．轻轻吹打混匀，若反转录引物为Oligo-dT Primer或Specific Primer时，42℃孵育2分
钟；若反转录引物为Random Primers，则25℃孵育10分钟。
7．加入1 μl SuperRT（200 U/μl），轻轻吸打混匀。42℃孵育50分钟。
8．85℃孵育5分钟。反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。
9．逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存。
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