BL21（DE3）感受态细胞说明书

BL21(DE3)感受态细胞说明书

BL21(DE3) Competent Cell

BL21(DE3)感受态细胞

目录号：YJ0809

保存条件：-80℃保存。

组分说明

                  Cat. No.                          YJ0809A

                  Size                              10×100 μl

                  BL21(DE3) Competent Cell          10×100 μl

                  Control DNA pUC19，0.1 ng/μl         10 μl

产品简介

　　本产品是大肠杆菌  BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于

DNA的热击转化。BL21(DE3)菌株适合表达非毒性蛋白，该菌株是以T7 RNA聚合酶为

表达系统的外源基因蛋白表达的宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受λ噬菌体

DE3区的lacUV5启动子调控，该区整合在BL21染色体上。使用pUC19质粒检测，转化

效率可达10 7

本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途 

    注意事项

    1．感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在  -80℃下保存，不可多次冻融和放

       置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。

    2．转化所有步骤均在无菌条件下操作。

    3．包装中有0.1 ng/μl的pUC19DNA，供对照试验使用。

    操作步骤

    1．取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μl，可以根据实际情况分装使用。

       以下实验以50 μl感受态细胞为例。

    2．待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量

       的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。

    3．42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。

    4．每个离心管中加入450 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。

    5．根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的   SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，

倒置培养，37℃培养12-16小时。

       注意：1）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心（4,000 rpm，2分钟）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。

2）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。