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用哪种固定方法 一般认为有两种：冷acetone和4％PFA 
我两种都用过，感觉用4%PFA做前固定过夜后糖脱水效果是的，但是有点费时费力，经过比较，用冷acetone做后固定 5分钟4摄氏度的效果也说得过去，也很方便省时。比较推荐！

blocking solution的配制和时间 我用的是5%serum 1％BSA 0.05%Tween PBS 室温染色盒内1个小时，如果不放心可以两个小时，但是一旦blocking了就要注意不能让切片干燥，所以个人认为一个小时应该够用了。(serum注意是和二抗同一种属）

blocking solution的使用量 我用的是每一张100μl

切忌保持湿度 染色开始后切忌不能让片子干燥了，一旦干燥了就会很糟糕，我也在这个地方吃了很多亏。。。
一抗的名称 使用浓度 染色时间 保持湿度 遮光否
二抗的名称 使用浓度 染色时间 保持湿度 遮光否

洗净方法 一抗之后我一般洗三次 5分钟换一次PBS 4摄氏度
二抗之后我一般洗四次 5分钟换一次PBS 4摄氏度

＃封片剂干燥时间 是30分钟以上，干燥后马上观察效果*是的

＃荧光显微镜的使用 建议一定要跟着老师，前辈，多观摩几次之后再自己动手

简单罗列了几个个人认为需要提前做好提纲的关键词，刚开始做的时候有挺多困难的，慢慢摸索也许会比较辛苦，
但是一旦量变到质变之后再加上反复回头看反复总结经验，就会有提高。