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虎杖中游离羟基蒽醌成分的提取和分离

上海雅吉生物科技有限公司

2015/9/25 10:00:52

虎杖为蓼科植物虎杖(Polygonumcus pidatum siedet Zucc)的根及根茎。别名阴阳莲,花斑竹。味苦、性微寒。能清热解毒、祛风利湿、利尿通淋、祛痰、止咳、通经等。主要用于湿热黄疸、风湿痹痛、淋浊带下、经闭、烫伤。
 
虎杖中含有较多的羟基蒽醌类成分及二苯乙烯类成分。其中主要有大黄素、大黄、大黄素-6-甲醚、大黄素3-D-葡萄糖苷及β-谷甾醇、鞣质等。虎杖得主要药理作用有抗菌、抗病毒及镇咳平喘、常用来治疗急性炎症、烧烫伤、肝炎、气管炎等。
 
虎杖中主要成分的结构与性质
1.大黄素(Emodin):橙黄色长针晶(丙酮中结晶为橙色,甲醇中结晶为黄色),mp256-257℃。几不溶于水,对于下列溶剂的溶介度分别为:0.01%,氯仿0.0718%,二硫化碳0.009%,0.14%,苯0.0415。易溶于乙醇,可溶于氨水,碳酸钠和氢氧化钠水溶液。
 
 
 
2.大黄酚(Chrysophanol):金黄色六角型片状结晶(丙酮中结晶)或针状结晶(乙醇中结晶)。mp 196℃,能升华。易溶于、氯仿、苯、冰乙酸、乙醇, 稍溶于甲醇,难溶于石油醚,不溶于水、碳酸氢钠和碳酸钠水溶液。可溶氢氧化钠水溶液及热碳酸钠水溶液。
 
 
 
 
3.大黄素6-甲醚,(Emodinmonomethl ether):金黄色针晶,mp207℃,能升华。可溶于氢氧化钠水溶液,溶解度与大黄酚相似。

 
4.大黄素6-甲醚6-D-葡萄糖苷(Anthraglycosibe A):黄色针晶(稀甲醇中结晶)mp230-232℃。

 
5.大黄素3-D-葡萄糖苷(Anthraglycoside B):浅黄色针晶(稀乙醇中结晶含1分子水mp190-191℃。

 
6.白藜芦醇(Resveratrol):无色针状结晶,mp256-257℃,216℃升华,易溶于、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等。

 
7.白藜芦醇葡萄糖苷(polydotinpeceid):无色颗粒状结晶,双熔点分别为130-140℃225~226℃,易溶于甲醇、乙醇、丙酮、热水,可溶于乙酸乙酯、可溶于碳酸钠和氢氧化钠水溶液中,稍溶于冷水,难溶于。
 
8.β-谷甾醇
 
9.鞣质:属缩合鞣质,可溶于醇及水,不溶于苯、、氯仿等。
 
另外。虎杖叶、茎中含少量羟基蒽醌类化合物、有机酸、槲皮苷、异槲皮苷、虎杖黄酮苷、扁蓄苷、金丝桃苷及芸苷、Vtio等。
 
实验原理:
羟基醌类化合物及二苯乙烯类成分,均可溶于乙醇中,故可用乙醇将它们取出来。羟基蒽醌类易溶于等弱极性溶剂,白藜芦醇苷在中溶解度很小,利用它们对的溶解性差异使羟基蒽醌类与白藜芦醇苷分离,再利用各羟基蒽醌类结构上的不同所表现酸性不同,用PH梯度萃取法分离它们。
 
实验方法:
(一)提取
乙醇总提取物的制备:取虎杖粗粉200g,于1000ml圆底烧瓶中回流,*次加500ml乙醇回流一小时,第二次加300ml乙醇回流30分钟,第三次加250ml乙醇回流30分钟,合并三次乙醇提取液,放置,如有沉淀可过滤一次,滤液减压回收乙醇至干,得膏状物。
 
(二)分离
1.亲脂性成分与亲水性成分的分离:
将上述膏状物加水10ml,100ml充分振摇后放置,将液倾于500ml三角瓶中(水层不可倒出),再于烧瓶中加50ml振摇,放置,倾出液,同法操作六次,合并液即为亲脂性成分--总游离蒽醌,提取过的剩余物中含水溶性成分。
 
2.游离蒽醌分离:
(1)强酸性成分的分高:将上述含总游离蒽醌的液置100ml分液漏斗中,加5%碳酸氢钠水溶液40ml萃取(测5%碳酸氢钠PH值),放置使充分分层,若提取过程中挥发可补充,分出碱水溶液同法提取二次,合并碱水提取液,在搅拌下缓缓滴加6N盐酸调至pH2注意观察颜色变化,稍放置即可析出沉淀,抽滤,用水洗涤沉淀中性,将沉淀置表面器上干燥,得强酸性成分。
(2)中等酸性成分--大黄素的分离:碳酸氢钠萃取过的液用5%碳酸钠溶液(测5%碳酸钠水溶液的pH值)萃取5~9次,每次40ml,直至萃取液较浅为止。合并碳酸钠提取液,小心加盐酸调pH3,放置,抽滤,水洗沉淀至中性,抽干,干燥称重。以甲醇一氯仿或苯一氯仿(1:1)重结晶,得大黄酚和大黄素6-甲醚混合物。
 
注:大黄酚和大黄素6-甲醚二者相互分离比较困难,在本实验薄层条件下为同一斑点,可用层析用磷酸氢钙进行柱层析,以石油醚洗脱,下层黄色带洗脱后,以甲醇重结晶可得大黄酚,上层黄色带洗脱后以甲醇重结晶可得大黄素6-甲醚。
(3)中性成分--甾醇类化合物分离:氢氧化钠萃取过的液,用水洗至中性,以无水硫酸钠脱水,回收得残留物,以甲醇热溶二次(10ml,5ml)过滤合并甲醇液,浓缩,放置结晶,滤取沉淀并用少量石油醚洗涤,再用甲醇重结晶,得β-谷甾醇,mp136~137℃,取少许结晶,做醋酐--浓硫酸反应,观察现象。
 
(三)鉴定
1.化学检识:分别取大黄素、大黄酚等少许,用溶解,做如下反应:
A:碱液试验:取试液1ml,加20%NaOH数滴,观察颜色。
B.醋酸镁反应:取试样1ml,加醋酸镁试剂数滴,观察现袋。
 
2.薄层鉴定:
吸附剂:硅胶-CMC
展开剂:C6H6-EtoAc(3:2或97:9)。
显色剂:(1)氨蒸气熏。(2)5%KOH喷雾。

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