如果说明书中有推荐的稀释比例，请按照该稀释比例进行实验。但是由于标本类型、实验条件、操作环境等各种因素的影响，推荐浓度仅作为参考。实验者需要在推荐浓度周围进行多个浓度梯度的实验，从中发现zui合适的稀释比例。
如果说明书没有推荐稀释比例，仅注明“Useatanassaydependentdilution”，就需要做大量的预实验来摸索zui合适的比例了。未纯化的抗体一般在说明书中不会标明抗体的浓度，因为大部分全抗血清、培养上清或腹水形式的产品浓度都是没有经过测定的。如果未纯化抗体产品的说明书中没有标明其中特异性抗体的浓度，实验者可以参考下表中“估计浓度”确定各种实验稀释比例。
一般来说，抗体说明书都会提供一个稀释度范围，但是，有些公司生产的抗体，其说明书上没有提供抗体稀释度。这是可以理解的，因为如果说明书上标明的抗体稀释度如果高的话，就说明这种抗体效价不高，质量不好。为此，实验者可以先在网上搜索一些相关的文献，文献的方法与材料中一般会把抗体来源以及稀释度都详细的标出的。但真正做实验时，还是要根据自己实验样品的情况和检测指标表达的丰富程度等因素先摸索一下抗体的稀释度的。
所以在做预实验时，就采用倍比稀释法，先做一个梯度，比如1：100，1：200，1：400，1：800，1：1600. 看看在这几个梯度范围内，样品中的目的蛋白的表达情况，然后再从中确定你认为的稀释度进行正式实验，这样做比较好一些。由于标本类型、实验条件、操作环境等各种因素的影响，推荐浓度仅作为参考。
一抗稀释液一般为PBS/0.4% Triton X-100/1%BSA。
