人诱导型多能干细胞（hiPS）培养方法
以下试剂和方法来自ATCC，仅供参考。若选用其它品牌的培养液请与您的试剂提供商。
hiPS无饲养层*培养液（ATCC，ACS-3002），hiPS无饲养层消化液（ATCC，ACS-3010），hiPS无饲养层冻存液（ATCC， ACS-3020），基质胶（ATCC，ACS-3035），ROCK Inhibitor Y27632（ATCC，ACS-3030）
复苏：
- 将人iPS细胞冻存管从液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁，防止污染。
- 用1 ml移液器轻柔地将冻存管内液体转移到15 ml离心管中。
- 在上述离心管内逐滴加入温育好的4 ml hiPS无饲养层*培养液，一边加一边晃动离心管。
- 离心1000 rpm，5 min。
- 将上清丢弃，轻弹离心管底部使细胞团松散。
- 加入1ml含有ROCK Inhibitor Y27632的hiPS无饲养层*培养液，非常轻柔地吹打2-3次。不可过度吹打，避免细胞被分散成单细胞。
- 将铺过基质胶的培养皿从培养箱取出，吸掉多余的液体，加入含有ROCK Inhibitor Y27632的培养液3 ml。
- 将第6步中离心管内的细胞悬液转移到皿内，使细胞铺散均匀，置37℃，5% CO2 培养箱内培养。
- 24h后，换新鲜的不加ROCK Inhibitor Y27632的hiPS无饲养层*培养液。
- 每天换液。ROCK Inhibitor Y27632仅在复苏和传代时添加（1:1000），日常换液不用添加。
传代：
- 将所需的所有试剂均在37℃水浴温热。
- 将培养皿内的培养液弃掉，用DPBS漂洗2遍，弃掉。
- 加入2 ml hiPS无饲养层消化液。
- 37℃孵育10-15分钟，期间注意观察，直到每个克隆的边缘都向中心卷起。
- 将hiPS无饲养层消化液吸掉，轻轻地加入4ml DMEM:F12培养液并晃动培养皿，吸掉。
- 加入2 ml含有ROCK Inhibitor Y27632的培养液，用1 ml移液器吹打皿底或用无菌的细胞刮使细胞脱落。避免吹打过度。
- 将细胞转移至15 ml离心管，并再次加入3 ml含有ROCK Inhibitor Y27632的培养液将培养皿冲洗一次，收集到离心管内。
- 离心1000 rpm，5 min。
- 将上清丢弃，轻弹离心管底部使细胞团松散。
- 加入2 ml含有ROCK Inhibitor Y27632的hiPS无饲养层*培养液，非常轻柔地吹打2-3次。不可过度吹打，避免细胞被分散成单细胞。
- 将细胞分到预铺了基质胶的培养皿内培养。
- 每天换液，4-5天传代一次，传代比例为1:2-1:6。当出现下列任何一种情况时，需要进行传代：细胞汇合度达到90%；干细胞克隆过大，*细胞生长不良；克隆有开始分化的迹象。
冷冻：
- 参照传代步骤1-9，hiPS无饲养层冻存液4℃保存，不需要预热。
- 在离心管内加入2 ml细胞冻存液，轻轻吹打，避免过度吹打。
- 将细胞悬液分装到贴好标签的冻存管内，每管0.5 ml。
- 将冻存管放入程序降温仪，置-80℃。
- 24h后，冻存管转入液氮保存。
