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免疫共沉淀(Co-IP)技术服务

上海闳巨实业有限公司

2015/11/20 10:47:00

免疫共沉淀(Co-IP)技术服务

免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)技术是检测蛋白质间相互作用的经典方法, 其基本原理是以细胞内源性靶蛋白为诱饵,将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行共孵育,促进免疫复合物的形成;随后加入能够与抗体Fc段结合的prorein A/G(预先结合固化在琼脂糖小珠上),形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-proteinA/G小珠”复合物,纯化该复合物后凝胶电泳分离蛋白,应用Western blot 或者质谱技术鉴定靶蛋白的结合蛋白。

与其它研究方法相比,免疫共沉淀zui大的优势在于该体系是在生理条件下检测蛋白质之间的相互作用,因此,不仅可以检测到体内形成的天然复合体,而且可排除过表达靶蛋白所带来的假阳性。其次内源性的靶蛋白质是*加工、修饰和成熟的蛋白质,因此,依赖于修饰的蛋白质相互作用也能被检测到。

免疫共沉淀(Co-IP)技术服务主要实验步骤:

1、构建表达质粒

2、共转细胞

3、收集并裂解细胞

4、加入蛋白A/G和抗体共同孵育

5、Western blot检测

服务须知:

由客户提供已构建好的目的基因表达质粒和抗体,如果不能提供构建好的表达质粒,则提供基因序列,由我公司提供克隆技术服务,须加收克隆服务费用。

上海闳巨实业有限公司有多种带标签的质粒可供选择:myc, HA, n-flag, GFP等。

技术服务完成后向客户提供详细的实验报告、测序单、质粒和X光胶片。

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