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细胞冻存解决方案

细胞冻存步骤：
1.预先配制冻存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存预冷； 2.用胰酶对细胞进行消化：倒去培养瓶中的培养基或用枪小心吸去培养板中的培养基，PBS冲洗两次，用胰酶消化细胞（尽可能温和）； 3.再次用*培养液悬浮细胞，将预冷的冻存液加入消化*的细胞中，用滴管轻轻吹打混匀。 4.在每支冻存管中加入1ml细胞液，密封后标记冻存细胞名称和冻存日期。 5.冻存步骤的细致直接关系到细胞复苏时的活力，如果有程序降温器（放在-80℃冰箱过夜，放入液氮罐）；或者可以在4℃，2h；然后转到-20℃，2h；-80℃，2h；放入液氮罐。

解决方案：
1.冻存液：A:dmso 推荐 sigma （货号D2650-100ml） B:胎牛血清根据自己习惯 1.DMSO 不用高压灭菌;DMEM不能高压灭菌 2.DMSO要用新的 ,而且要避光保存.. 3.DMSO:含10%FBS的DMEM=1:9(体积比) 2.胰酶（hyclone 货号 sh30042.01） pbs （hyclone 货号sh30256.01b）培养瓶，离心管推荐coring 或者 falcon 枪头推荐axygen （axygen枪头已经基本国产化） 3.冻存管推荐axygen的彩色冻存管，有各种颜色的盖子，方便分类。且性价比较高。目前市场上nunc 和corning的一次性冻存管使用也很广泛，但如果量大不如axygen冻存管划算。现在还提供底部印有二维码的方便识别的冻存管。 4.冻存盒：推荐使用biologix的纸质冻存盒，标注清晰，书写后不容易掉色，且有各种颜色可选。同时也有塑料冻存盒供使用。质量高，价格低。 5.程序降温盒：推荐 nalgene（货号 5100-0001）。使用zui广，*的程序降温盒。 6.液氮罐：根据需求，1000个样本的储存空间，推荐金凤的yds-50b-125，含6个6层25孔方提桶，保护罩及一只真空安全帽，含不锈钢盒，zui多放900只样本。 7.另外还有冷冻记号笔，不锈钢冻存盒架，细胞滤网，冻存管支架等等。

液氮罐使用注意事项：
1. 容器的使用维护：充液氮前要用少量的液氮预冷；补充液氮的时机是液氮剩余量为总容量的1/3为宜；严禁在容器盖上放置物体和密封瓶口；严防敲击碰撞。 2. 不能用其他塞子代替罐盖，更不能密封塞子，以免液氮蒸发，压力增高，损伤容器；检查容器液面高度时，应用塑料小棒或实心小木棒插入底部，过5-10s后取出，结霜的长度即为液面高度。

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