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BEL-7402细胞 人肝癌细胞

通派(上海)生物科技有限公司

2015/12/21 11:10:19

变性梯度凝胶电泳:

变性梯度凝胶电泳(DGGE)是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链,称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为熔解温度(Tm)。Tm值主要取决于DNA分子中GC含量的多少。DGGE将凝胶设置在双重变性条件下:温度50-60 ℃,变性剂0-100%。

786-0细胞 人肾透明细胞腺癌细胞
95-D细胞人高转移肺癌细胞
A172细胞人胶质母细胞瘤细胞
A3细胞 人T淋巴细胞白血病细胞
J82细胞人膀胱移行细胞癌
A-431细胞 人表皮癌细胞
A549细胞人非小细胞肺癌细胞
A-673细胞 人横纹肌瘤细胞
A7r5细胞 大鼠胸大动脉平滑肌细胞
A9细胞 小鼠皮下结缔组织细胞
AAV-293细胞 人胚肾细胞

当一双链DNA片段通过一变性剂浓度呈梯度增加的凝胶时,此片段迁移至某一点变性剂浓度恰好相当于此段DNA的低熔点区的Tm值,此区便开始熔解,而高熔点区仍为双链。这种局部解链的DNA分子迁移率发生改变,达到分离的效果。Tm的改变依赖于DNA序列,即使一个碱基的替代就可引起Tm值的升高和降低。

ACHN细胞 人肾细胞腺癌细胞
AGS细胞 人胃腺癌细胞
AML-193细胞 人急性单核细胞白血病单核细胞
Ana-1细胞 小鼠巨噬细胞
AR42J细胞大鼠胰腺外分泌细胞
AsPC-1细胞 人转移胰腺腺癌细胞
AtT-20细胞 小鼠垂体瘤细胞
B16细胞 小鼠黑色素瘤细胞
因此,DGGE可以检测DNA分子中的任何一种单碱基的替代、移码突变以及少于10个碱基的缺失突变。
为了提高DGGE的突变检出率,可以人为地加入一个高熔点区——GC夹。GC夹(GC clamp)就是在一侧引物的5′端加上一个30-40bp的GC结构,这样在PCR产物的一侧可产生一个高熔点区,使相应的感兴趣的序列处于低熔点区而便于分析。因此,DGGE的突变检出率可提高到接近于100%。

Y1细胞,小鼠肾上腺皮质细胞
YAC-1细胞,小鼠淋巴瘤细胞
ZR-75-1细胞,人乳腺癌细胞
ZR-75-30细胞,人乳腺癌细胞
293细胞 人胚肾细胞
293T细胞人胚肾细胞
293T/17细胞 人胚肾细胞

作为一种突变检测技术,DGGE具有如下的优点:
1:突变检出率高。DGGE的突变检出率为99%以上。
2:检测片段长度可达1kb,尤其适用于100-500bp的片段。
3:非同位素性。DGGE不需同位素掺入,可避免同位素污染及对人体造成的伤害。
4:操作简便、快速。DGGE一般在24小时内即可获得结果。
5:重复性好。但是,该方法需要特殊的仪器,而且合成带GC夹的引物也比较昂贵。

实验用品
1.PCR扩增仪;变性梯度凝胶电泳仪;凝胶成像及分析系统;紫外透射仪;高速离心机;电泳仪;电泳槽。
2.尿素、去离子甲酰胺、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、琼脂糖
3.微量加样器(200μl,20μl);Tip头(200μl,20μl)。Tip头盒(200μl,20μl);Eppendorf管(0.5ml,0.2ml),Eppendorf管架。
4.PCR扩增相关试剂

TE-10细胞,人食管癌细胞
TE-1细胞,人食管癌细胞
Tca-8113细胞,人舌鳞癌细胞
T-47D细胞,人乳腺管癌细胞
T24细胞,人膀胱移行细胞癌细胞
WEHI 231细胞,小鼠B 淋巴细胞
WI-38细胞,人胚肺细胞
WISH细胞,人羊膜细胞
2V6.11细胞 人胚肾细胞
3T3-L1细胞 小鼠胚胎成纤维细胞
4T1细胞 小鼠乳腺癌细胞
5637细胞人膀胱癌细胞
6T-CEM细胞 人T细胞白血病细胞
769-P细胞 人肾细胞腺癌细胞
Acc-2细胞人涎腺腺样囊性癌细胞
Acc-3细胞人涎腺腺样囊性癌细胞
BxPC-3细胞 人原位胰腺腺癌细胞
BT-549细胞 人乳腺管癌细胞
BT474细胞 人乳腺导管癌细胞
BRL 3A细胞 大鼠肝细胞
BRL细胞 大鼠肝细胞
BNL CL.2细胞 小鼠胚胎肝细胞
BGC-823细胞 人胃腺癌细胞
Beta-TC-6细胞 小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞
BEL-7405细胞 人肝癌细胞
BEL-7404细胞 人肝癌细胞
BEL-7402细胞 人肝癌细胞
BEAS-2B细胞 人正常肺上皮细胞
Bcap-37细胞 人乳腺癌细胞
B95-8细胞 绒猴EBV转化的白细胞
B16-F10细胞 小鼠皮肤黑色素瘤细胞

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