文章标题：MC38细胞 MC38细胞 细胞株培养
文章来源：慧颖细胞库
细胞名称 | 结肠癌细胞MC38 |
种属 | 小鼠 |
生长状态 | 贴壁生长 |
培养条件 | 培养基类型：1640培养基 FBS（Serana胎牛血清（货号：S-FBS-SA-015）): 10% 抗生素：双抗 培养条件：37℃，CO2: 5% |
传代方法 | 收到细胞后，在倒置显微镜下观察细胞生长状态： 如果没长满，将培养瓶用75%酒精消毒后在超净台内更换新鲜培养液，继续培养。 如果细胞已经长满（约80%-90%）则传代后继续培养。 贴壁细胞传代方法： 1 弃去培养基，用不含钙、镁离子的PBS洗1-2次。 2 加1ml 0.25%的胰酶（含0.02%EDTA），让胰酶与大部分细胞接触后放入37℃培养箱内，随时观察细胞状态变化，待细胞大部分变圆后加*培养基终止消化。 悬浮细胞传代方法：可以直接传代也可以离心法传代。 1 直接传代是让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后，将上清吸掉1/2-2/3，吹打细胞形成细胞悬液后，分别接种到其他培养皿或培养瓶中继续培养。 2离心法传代是将细胞连同培养液一并转移到离心管内， 1000rpm，5分钟，去除上清，加新的培养液到离心管内，吹打细胞形成细胞悬液后，分别接种到其他培养皿或培养瓶中继续培养。 一般没有特殊说明，细胞一般是一传二。 |
冻存方法 | 70% *培养基，20%FBS，10%DMSO，现用现配。 储存：液氮中长期保存。 |
注 | 1 观察细胞在低倍镜下观察，便于整体估计细胞密度。 2 在运输过程中可能会导致一些贴壁不牢的细胞发生部分脱落，可离心吹打后重新种入瓶中培养。 3 收到细胞后若发现培养瓶破损、细胞污染等，请拍照并在一周内与我们。 |
注意：慧颖细胞库所用胎牛血清是德国SERANA南美优等胎牛血清，货号：S-FBS-US-015；我们建议客户继续使用此款血清。您购买细胞时，我们会免费赠送20-50ML试用装一瓶。
MC38细胞 MC38细胞 细胞株培养
如何预防细胞培养的污染和清除这些污染物呢？慧颖 细胞库 技术为您解答：
一、污染的预防
预防是防止细胞培养过程中发生污染的办法。只有预防工作做在前，才能将发生污染的可能性降到zui小程度。一般预防可从以下几方面着手：
1-从操作者做起
1操作者责任心要强，要细心稳重，操作技术要熟练。进无菌室前要用肥皂洗手或用5%新洁尔灭浸泡5分钟，按规定穿隔离衣。进入后关好门，坐下来尽量少走动。工作开始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。事先要严格检查器材、溶液和培养物，不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内，更不能随便使用，以免造成大批污染。
2、操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话，若打喷嚏或咳嗽应转向背面。
3、操作时要常更换吸管，切勿一根吸管做到底。一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。实验完毕及时收拾，保持实验室清洁整齐，zui后用消毒水浸泡的纱布擦台面。
2-从物品、用品消毒灭菌着手
细胞培养所用物品清洗、消毒要*，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌试验阴性后才能使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。
3-防止细胞交叉污染
在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分，做上标记便于辨别。并按顺序进行操作，避免一起进行时易发生混乱。
在进行换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。
所有细胞一旦购置，或从别处引入，或自己建立，均应及早留种冻存，一旦发生污染可弃之复苏，重新培养。
二、污染的清除
培养细胞一经污染，多数较难处理。如果污染细胞价值不大，宜弃之；有细胞株留存的或可购置的，可在寻找原因后*消毒操作室，复苏或重新购置细胞，再培养。若污染细胞价值较大，又难于重新得到，可采取以下办法清除。
1-使用抗生素
抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。预防用药一般用双抗生素（青霉素100u/mL加链霉素100μg/mL），污染后清除用药需采用大于常用量5～10倍的冲洗法，于加药后作用24～48小时，再换常规培养液。此法在污染早期可能有效。所用抗生素品种除青霉素、链霉素外，还可用庆大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四环素、制霉菌素等。常用400～800μg/mL卡那霉素或200μg/mL四环素处理，每隔2～3日换液1次，传1～2代进行治疗。近年来有报道，4-氟，2-羟基喹啉（Ciprofloxacin,Cip）、截耳素衍生物（Pleu-romutilinderivative,BM-Cyclin2:BM-1和四环素衍生物（BM-2）等三种抗生素单用或合用对杀灭支原体有效。这三种抗生素均用PBS配成250浓缩液，-20℃保存备用，使用浓度Cip为10μg/mL，BM-1为10μg/mL，BM-2为5μg/mL。使用时先吸除污染的培养液，加入含BM-1的RPMI1640培养液，3天后再吸除培养液，加入含BM-2的RPMI1640培养液，培养4天，如此连续3个轮次，直至用33258荧光染色镜检证明已清除支原体后，再加正常培养液培养传代3-4次。
2-使用支原体特异性血清
用5%的兔支原体免疫血清（血凝效价1:320以上）可去除支原体污染，因特异抗体可抑制支原体生长，故经抗血清处理后11天即转为阴性，并且5个月后仍为阴性。但此法比较麻烦，不如用抗生素方便、经济。
3-加温处理
将污染的组织培养物放在41℃培养18小时，可杀死支原体，但对细胞有不良影响。所以在处理前要进行预试验，摸索能zui大限度杀死支原体又对细胞影响zui小的加热时间。此法有时不可靠。若先用药物处理后，再以41℃加温处理效果更佳。
4-其他方法
除了上述去除污染的方法外，还有动物体内接种除菌法、巨噬细胞吞噬法、污染培养瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及过滤法等，但均较麻烦，且效果不确定。所以一旦支原体污染，除非有特别重要价值，一般均弃之重新培养。
乳腺癌细胞：HCC1395细胞，人乳腺导管癌细胞
SUM149PT细胞，人乳腺癌细胞
SUM1315M02，人乳腺癌细胞
L56BRC1细胞，人乳腺癌细胞
HCC1599细胞，人乳腺导管癌细胞
卵巢癌细胞 UWB1.289细胞，人卵巢癌细胞
