分光光度计工作原理的限制性条件分光光度计的工作原理是是物质对光的选择吸收和琅伯-比尔定律。
论琅伯-比尔定律的限制性条件：
其一：通过溶液的光必须是平行的；
其二：通过溶液的光必须是单色光；
其三：待测溶液必须是纯净的、均匀的且浓度不宜过高，这是琅伯-比尔定律首要的三个前提条件。
在实际的分光光度计的制造和使用过程中这三个条件是不可能达到的：
其一：因为光是直线传播的，在分光光度计制造过程中，灯源发出的光是发散的，经过聚焦镜进行聚焦等直到经过溶液的整体过程中，光是不可能平行的。
其二：灯源发出的光是复合光，经过狭缝，再经过光栅分光等步骤，因为受到狭缝和光栅本身的限制，光栅分光不可能达到纯单色光。还有光度计的整体设计问题，光度计不可能没有其它的杂光存在。
其三：用户的溶液也不可能是纯净的，也会含有一些杂质，这些对光度的吸收都会存在影响。除以上三个方面的影响外，在实际的光度计应用过程中还会存在其他因素的影响，例如：
1、经过比色皿的光是否垂直；
2、比色皿宽度是否为10mm的标准值；
3、测试波长是否准确；
4、程序设计是否存在漏洞等等，都会直接影响到利用琅伯-比尔定律计算出的结果。
所以在日常的测试过程中，得出的结果和琅伯-比尔定律有些偏差是很正常的，只是我们关注偏差多少的问题。
