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2016/4/22 9:18:33回收DNA片段实验步骤，一、从琼脂糖介质中纯化DNA片断
1. 用低熔点或常规熔点琼脂糖电泳对PCR扩增片断进行分离，该电泳安常规方法进行，缓冲液为TAE。
2. 在凝胶上，找到所需条带，然后用洁净并灭菌的小刀将其切下接近300微升琼脂糖凝胶 （约300毫克）
3. 如果切下的琼脂糖为高融点的则安下面A步骤进行，如为低融点琼脂，则安B步骤进行。
A. 将300微升琼脂块放进1.5毫升的微量离心管中，加入1毫升纯化用树脂，然后将其置于65℃水浴保温5分钟，或保温至琼脂*溶解。
B. 将300微升琼脂块放进1.5毫升的微量离心管中，然后将其置于70℃水浴保温至琼脂*溶解，然后加入1毫升纯化用树脂到融化好的琼脂中，将其混合20秒，但不要振动。
4. 为每一个待回收片断准备好一个微量柱。 在每个柱的开口处，联上一针筒，然后将这些柱与针筒的复合体与抽真空设备相连
5. 在柱-针筒复合体中加入树脂/DNA混合物，打开真空装置，将树脂与DNA的混合物抽到微量柱中，断开真空装置与柱的连接。
6. 洗柱，加入2毫升80%的异丙醇，打开真空装置，使这些洗柱液*流经微量柱。
7. 继续真空30秒以干燥树脂，注意此干燥时间不能超过30秒。关闭真空，移去针筒。将微量柱转移至一1.5毫升微量离心管中。10 000 g 离心2分钟，以*除去残存的异丙醇。
8. 将微量柱，再转移至一新的1。5毫升微量离心管中，加入50微升水或TE缓冲液，静置1分钟（在头30秒，DNA仍将吸附于柱上）， 10 000 g 离心20秒，以洗脱DNA片断，所得纯化后的DNA片断可直接用于连接反应或在-20℃保存。
回收DNA片段实验步骤，二、尿素丙烯酰胺变性胶中分离DNA片断
1. 从变形胶上切下待回收片断，将其放如一微量离心管中。
2. 加入100微升TE缓冲液，37℃保温30分钟以上。
3. 将上清液吸入一新管中，加入1毫升树脂，振荡20秒以混匀树脂与清液。回收DNA片段实验步骤
