定氮仪是利用凯氏定氮法对物质中蛋白质含量进行测定的仪器。定氮仪按其配置分,可以分为全自动凯氏定氮仪和半自动定氮仪。其中全自动凯氏定氮仪包括消化炉和凯氏蒸馏装置。定氮仪操作时可以分为人工模式和自动模式,不同的实验者,可以根据对实验操作的熟练程度,自由选择哪种方式。目前,定氮仪已经广泛使用于测定乳核乳制品中蛋白质的测定。
下面我们主要介绍下,我们在使用定氮仪测定蛋白质含量时,如何清洗定氮仪。
仪器安装前,定氮仪各部件需经一般方法洗涤干净,所用橡皮管、塞须浸在10%NaOH溶液中,煮约10min,水洗、水煮10min,再水洗数次,然后安装并固定在一只铁架台上。
仪器使用前,微量全部管道都须经水蒸气洗涤,以除去管道内可能残留的氨,正在使用的定氮仪,每次测样前,蒸气洗涤5min即可。较长时间未使用的仪器,重复蒸气洗涤,不得少于三次,并检查仪器是否正常。仔细检查各个连接处,保证不漏气。这样,一方面保证了仪器的清洁,另一方面,也同时对仪器进行了检查,一些坏的零部件,可以及时被查出并替换。
定氮仪安装完后,我们需具体对仪器的内部进行清洁。首先在定氮仪蒸气发生器中加约2/3体积蒸馏水,加入数滴硫酸使其保持酸性,以避免水中的氨被蒸出而影响结果,并放入少许沸石(或毛细管等),以防爆沸。这个步骤有点类似于凯氏定氮法的消化前步骤,用相应的试剂对其进行清洗。沿小玻杯壁加入蒸馏水约20mL让水经插管流入反应室,但玻杯内的水不要放光,塞上棒状玻塞,保持水封,防止漏气。这一步可直接验证插管是否可以使用。蒸气发生后,立即关闭废液排放管上的开关,使蒸气只能进入反应室,导致反应室内的水迅速沸腾,蒸出蒸气由反应室上端口通过定氮球进入冷凝管冷却,在冷凝管下端放置一个锥形瓶接收冷凝水。从定氮球发烫开始计时,连续蒸煮5min,然后移开煤气灯。冲洗完毕,夹紧蒸气发生器与收集器之间的连接橡胶管,由于气体冷却压力降低,反应室内废液自动抽到反应室外壳中,打开废液排出口夹子放出废液。整个清洗过程,到这里就结束了,经过清洗这个过程,定氮仪内部环境已经符合我们测定蛋白质含量的需求,另外,定氮仪的各部件也得到了检验,可以及时更换漏气或者其他坏了的部分。根据以上步骤重复清洗2~3次,再在冷凝管下换放一个盛有硼酸-指示剂混合液的锥形瓶使冷凝管下口*浸没在溶液中,蒸馏1~2min,观察锥形瓶内的溶液是否变色。如不变色,表示蒸馏装置内部已洗干净。移去锥形瓶,再蒸馏1~2min,用蒸馏水冲洗冷凝器下口,关闭煤气灯,定氮仪即可供测样品使用。
这样,凯氏定氮仪整个清洗过程就结束了。凯氏定氮仪在测定蛋白质含量前,一般都需要经过清洗,这样对于测定结果,会更加。另外,也可以保证实验室人员的安全,因为在清洗过程中,对仪器进行了检查,排除了因为仪器的故障而造成了危险