在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。在细胞发生凋亡时，膜磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的变化，而此时Propidium Iodide（PI）不能通过细胞膜。
细胞坏死时，虽然也会发生磷脂酰丝氨酸外翻，但此时细胞膜的通透性明显增加，PI等核酸染料进入细胞与细胞核中的核酸结合，发出红色荧光。所以Annexin V-FITC(绿色荧光)常与鉴定细胞死活的核酸染料（如PI）合并使用，来区分凋亡细胞与死亡细胞。
技术原理及步骤
1. 离心收集细胞，微量离心机转速1000 rpm，离心时间5 min，弃培养基。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次。
3. 用400 μL1× Binding Buffer悬浮细胞，浓度大约为1×106 cells/mL。
4. 在细胞悬浮液中加入5 μlLAnnexin V-FITC，轻轻混匀后于2~8°C避光条件下孵育15min。
5. 加入10 μL PI后轻轻混匀于2~8°C避光条件下孵育5 min。
6. 在1小时内用流式细胞仪或荧光显微镜检测。
应用实例
应用领域
细胞的早期凋亡及区分凋亡与坏死细胞
服务周期
我公司在正式接受实验委托2个星期左右完成实验并提供实验报告。
客户须知（对材料的要求、注意事项）
需提供细胞类型，处理条件。
慧颖生物专业血清10年，我们不生产血清，我们只是高品质动物血清的搬运工
血清是一种成分复杂的混合物，不同批次血清对细胞生长的促进作用不同。大规模细胞培养中由血清引起的细胞生长状态不佳及病毒滴度的影响表现在以下几个方面：
1、细胞生长速度缓慢，长满单层时间长；从同一细胞瓶中分出两瓶细胞，用同一种培养液，分别加入10％的对照血清和待检血清，在相同条件下培养72小时，会出现对照血清长满单层，而待检血清大约只有60～70％，这种血清就不适合用来大规模培养细胞。
2、细胞传代后形态不正常，细胞状态发生变化 ；由于血清的质量问题，使原本状态正常的细胞经传代后形态会变差；比如：细胞瓶里会出现一些蠕动的小黑点（并非污染），或者细胞表面形成一层油状覆盖物；细胞的轮廓变得模糊，细胞之间的间隙被血清中的蛋白颗粒填充，从而影响细胞向四周扩展生长。
3、细胞传几代后就出现脱壁现象，不能连续传代 ；质量较差的血清缺乏某种细胞的贴壁因子，会使细胞在传代过程中逐渐丧失贴壁的能力。细胞会从正常的贴壁状态，边缘开始萎缩，上翘。观察到的现象就是细胞表面不光滑，晃动细胞瓶会看到细胞表面有絮状物随培养液波动。随着传代次数增加，细胞萎缩的情况越来越严重，直到zui终*脱壁而死亡。
4、细胞长的很好，致密的单层，状态也很正常，但是接毒后细胞基本不发生病变，做滴度检测几乎测不出抗原滴度。这种情况也许是因为血清中含有与接种的病毒有同源的特异性抗体。比如血清中经常会存在乙脑抗体，牛腹泻病毒抗体等，如果存在这些抗体，就会把接进去的病毒给中和掉。如果抗体滴度很高，病毒会被抗体*中和，就没有病毒颗粒在细胞中增殖，所以会检测不到病毒滴度。这种情况给疫苗企业造成的损失是相当大的，不产毒等于前面所做的那么多工作全部白费，浪费人力、物力，尤其是时间上的浪费，从培养细胞开始到接病毒，到收液至少需要一两个月，一旦出现不产毒的情况，那么这一两月时间就白白浪费掉了，这也是牛血清给疫苗企业造成的风险之一。
5、细胞生长的状态一般，产毒少，毒价低。这种情况比较常见，细胞是病毒的载体，由于血清质量不好，导致细胞生长状态不好，病毒就无法进行正常的复制。并非所有病毒都不能复制，所以就造成疫苗的效价不够，可能造成不合格产品。
看来一款血清直接关系细胞的生死存亡，不用担心，慧颖提供无支原体，低内毒素和低血红素的，无反复冻融的高品质血清
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