FO细胞

文章标题：FO细胞

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中文名称：小鼠骨髓瘤细胞

生长状态：贴壁生长

来源：美国ATCC

在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。在细胞发生凋亡时，膜磷脂酰丝氨酸外翻的发生早于细胞核的变化，而此时Propidium Iodide（PI）不能通过细胞膜。

细胞坏死时，虽然也会发生磷脂酰丝氨酸外翻，但此时细胞膜的通透性明显增加，PI等核酸染料进入细胞与细胞核中的核酸结合，发出红色荧光。所以Annexin V-FITC(绿色荧光)常与鉴定细胞死活的核酸染料（如PI）合并使用，来区分凋亡细胞与死亡细胞。

技术原理及步骤

1. 离心收集细胞，微量离心机转速1000 rpm，离心时间5 min，弃培养基。

2. 用冷PBS洗涤细胞两次。

3. 用400 μL1× Binding Buffer悬浮细胞，浓度大约为1×106 cells/mL。

4. 在细胞悬浮液中加入5 μlLAnnexin V-FITC，轻轻混匀后于2~8°C避光条件下孵育15min。

5. 加入10 μL PI后轻轻混匀于2~8°C避光条件下孵育5 min。

6. 在1小时内用流式细胞仪或荧光显微镜检测。

应用实例

应用领域

细胞的早期凋亡及区分凋亡与坏死细胞

服务周期

我公司在正式接受实验委托2个星期左右完成实验并提供实验报告。

客户须知（对材料的要求、注意事项）

需提供细胞类型，处理条件。

选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。

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