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2016/5/12 9:56:57导言
近几年来,3D(three dimensional)细胞培养系统开始成为生物学研究新的研究方法。使用3D系统培养系统能更好的模拟生物体内的真实生理环境,而2D(传统的贴壁培养)细胞培养系统不能有效的模拟细胞在生物体内的生理环境。3D细胞技术有很多种方法,使用多细胞形成的细胞团是其中主要的研究应用之一。细胞团是微小的细胞聚集簇,可以用来研究3D情况下向外生长的情况(细胞出芽)。
一.实验原理
目前有几种方法可以用来生成细胞团。 所有方法的原理都是防止细胞贴壁,并且创造环境增强临近细胞间的细胞外基质的粘附。这里我们提供的是一个液体胶的形式来形成细胞团。这是一种形成细胞团的非常简单的方法,有如下的优势:
1)可以形成单个细胞团,并且易于用显微镜观测;
2)易于换液,可以进行长时间的培养;
3)这个方法操作简单,不需要额外的设备就能完成。
简单来讲就是先在多孔板底部加入琼脂糖,之后再加入细胞悬液。加入琼脂糖不仅仅是提供了个疏水表面,细胞不会粘附,又提供了一个凹液面,细胞可以聚集在凹孔中,加大了细胞和细胞之间接触的几率,增强了细胞之间的粘附。
二.实验材料
96孔板,平底(Corning 3370)
血管生成载玻片(德国ibidi,81506)
1.5%琼脂糖(Sigma,A9539,使用PBS或者超纯水配置)
胰酶
Matrigel
细胞培养基
三.成团实验步骤
1)96孔板预处理
2.细胞成团
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图一:不同细胞系的成团过程(每孔500个细胞),比例尺 200μm。
四.出芽实验及分析
实验步骤:
2.凝胶
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3.细胞出芽实验及图像分析