人外周血白细胞分离液实验方法

人外周血白细胞分离液实验方法WBC1077k
 
（细胞培养及分子生物学）
 
【产品规格】
 
200ml/Kit
 
【产品组成】
 
为方便广大用户使用，试剂内容如下：
 

 
全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。
 
首先取抗凝血，根据样本量大小，分以下两种情况：
 
情况 A：血液样本量小于 5ml 时，实验方法如下：
 
1.       取一支 15ml 离心管，先加入 5ml 分离液
 
2.       用吸管小心吸取血液样本加于分离液液面上，400-500g，离心 20-30min（注：如改
变血液样本及分离液用量，需相应调整离心力及离心时间，具体离心条件需客户自行摸
 
索，以达到分离效果。）
 
3.       离心后用吸管小心吸取所有环状乳白色细胞层（一层或两层），加入 10 ml 清洗液（产 品编号：2010X1118），混匀细胞。250g，离心 10min。重复洗涤 2-3 次，即得所需白细 胞。
 
4.       如有红细胞残留请使用红细胞裂解液（产品编号：NH4CL2009）裂解红细胞，具体操
 
作方法详见“红细胞裂解液使用说明”。
 
情况 B：血液样本量大于等于 5ml 时，实验方法如下：
 
1.       取一支适当的离心管，先加入与样本等量的分离液。
 
2.       将血液样本小心加于分离液之液面上，450-650g（zui大离心力可至 1000g），离心 20-30min。（注：根据血液样本量确定离心条件，血液量越多，离心力越大，离心 时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到分离效果。加入血液样本后，样 本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二）。
 
3.       剩余步骤同“情况 A”中步骤 3 与步骤 4。
 
【注意事项】
 
1.    全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得的实验结果，zui 好在取血 2h 内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过 6h 后 分离效果更差甚至不能达到分离目的。
 
2.    本实验不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离 心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面 会变成毛面，影响细胞分离效果。
 
3.    分离液用量大于稀释后血液样本时，分离效果更佳。
 
4.    当血液样本粘度过高需稀释时，*稀释方法：将血液与样本稀释液（产品编号： 2010C1119）1:1 稀释混匀备用。注：不当的稀释方法会降低细胞得率及活性。如血液样 本经过稀释则分离过程中需适当降低离心力和离心时间。
 
5.    如实验后细胞得率或活性过低，请以寻求帮助，具体详 见下方生产企业信息。
 
【储存条件及有效期】
 
18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启
 
封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
 
【参考值（参考范围）】
 
本实验白细胞提取率及纯度大于 80%。
 
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。
 

 
【相关实验技术方案】
 
1.       所获得白细胞的培养技术。
 
2.       所获得白细胞的核酸提取技术。
 
3.       所获得白细胞的鉴定方法 A.流式细胞技术 B.免疫组化技术 C.原位杂交技术
 
D.PCR 技术
 
注：上述技术方案详情请登陆本搜索“细胞分离、
 
纯化、扩增、鉴定及生物治疗技术手册”，并在说明书项目栏下下载使用。
 
【可能存在的问题及解决方法】
 
1.    由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：
 

 
2.       本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地 区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离 心时间，对离心转速进行调整。
 
3.       本分离液依照标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可 能出现红细胞沉降不*的情况，可以适当加大离心转速。
 
注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以 50-100g 为基数，直至达到分离效果，
离心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。