TRIzol使用注意事项

TRIzol（Invitrogen）使用注意事项

警告：

TRIzol试剂与皮肤接触及吞咽有毒。可导致烧伤。与皮肤接触后，应立即用洗涤剂和大量清水冲洗。如感到身体不适，应就医（如需要，请出示本产品标签）。本产品含有苯酚和其他成分。已经证明TRIzol?在室温下可稳定保存12个月。但我们建议在储存于2-8°C，以保证佳性能。

性能描述：

TRIzol试剂（美国号，5346994）是即用型细胞或组织总RNA提取试剂。该试剂是利用苯酚和异硫氰酸胍一步完成提取RNA的方法，是对Chomczynski和Sacchi开发的单步RNA提取法的改善。在匀质化或裂解样品中，TRIzol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞并溶解细胞成分。加入氯仿离心后，溶液分离成水相和有机相。仅RNA存在于水相中。将水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，样品中DNA和蛋白质可通过相继沉淀回收。用乙醇沉淀可从中间相得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

此技术既可良好的应用于少量组织（50-100mg）和细胞（5×106），也可用于大量的组织（≥1g）和细胞（>107）的处理，组织和细胞不限于人、动物、植物或细菌。TRIzol试剂使用简单方便，可同时处理大量样本。整个过程可在一小时内完成。用TRIZOL提取总RNA可避免蛋白质和DNA污染。提取的RNA可用于Northern?blot分析、斑点杂交、poly（A）+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。

TRIzol试剂方便提取不同种类、不同分子大小的RNA。例如，从大鼠肝中提取RNA，经琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色，高分子量RNA离散带长度可高达7kb和15kb，(组成mRNA’s和hnRNA’s)，两个主要的核糖体RNA带在~5kB（28S）和~2Kb（18S）。低分子量RNA介于0.1和0.3kB之间（tRNA，5S）。分离出的RNA用TE稀释，其A260/A280比值≥1.8。

防止RNA酶污染的注意事项

在不当的技术操作过程中，RNA酶可在任何提取程序中意外引入RNA的制备中。由于酶的活性难以抑制，所以必须防止其引入。进行RNA工作时，下列准则应予以遵守。

①一直戴着手套。皮肤上通常包含的细菌和霉菌，可污染RNA的制备，同时也是RNA酶的一个来源。良好的微生物操作技术可防止微生物污染。

②使用无菌制品，专为RNA工作准备的一次性塑料器皿和自动吸管避免与共用设备的RNA酶交叉污染。例如，一个实验室正在使用的RNA探针可能用得上RNA酶A或RNA酶T1以减少过滤背景，其中任何非一次性物品（如自动吸管）可能是大量RNA酶的来源。

③TRIzol试剂可保护RNA酶对RNA的污染。下游样品处理要求非一次性的玻璃器皿或塑料器皿无RNA酶。玻璃物品可以在150℃烘烤4小时，塑料制品，可浸泡10分钟的0.5?M?NaOH溶液，然后用清水*冲洗，并高压蒸汽灭菌。

其他需要注意的事项：

①用小于2毫升体积的TRIZOL试剂工作时，建议使用一次性透明聚丙烯管。

②对于较大的体积，用玻璃（Corex）或聚丙烯管，并测试以确保该管装满TRIzol试剂和氯仿时可承受12,000×g的离心力，不要使用泄漏或有裂纹的管子。

③离心前平衡管子的重量

④玻璃管必须用封口膜密封，密封时封口膜要覆盖有螺丝处，聚丙烯管离心前必须盖好。

警告：

当使用TRIzol试剂工作时，应使用手套，并保护眼睛（屏蔽、安全护目镜）。避免与皮肤或衣服接触。使用化学通风橱。避免吸入蒸气。除非特别注明，所有程序均在15?-30°C下进行。