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Thermo 反相色谱柱使用和维护说明

济南兴诺科技发展有限公司

2016/7/27 17:06:39

首先,感谢您选择性能*的 Thermo 色谱柱产品。

为了使您的色谱柱能发挥zui大的性能,敬请先阅读以下说明:

 

1、 适用键合相

反相色谱柱键合相包括:C18、C8、C4、C1、Phenyl、PFP、aQ、Cyano1等。

 

2、 柱体积

色谱柱的柱体积可以通过以下公式估算:

                             V = 0.68πr2L

V 为色谱柱柱体积(mL),r 为色谱柱内径(cm),L 为色谱柱的长度(cm)。

 

3、 色谱柱柱效测试与保存

    反相色谱柱出厂时都经过柱效测试,所用化合物为茶碱、邻-硝基苯胺、苯甲酸甲酯和二甲苯,如有不同,以柱效报告为准。

    在条件允许情况下,请对新色谱柱进行柱效测试。

    反相色谱柱出厂时均保存在乙腈-水溶液中。

 

4、 温度

所有硅胶基质色谱柱使用温度应低于 60℃。

 

5、 样品

    将样品溶解在流动相或极性相近的溶剂中。如果使用梯度洗脱,则需要将样品溶解在初始流动相或极性相近的溶剂中。

样品溶液不应含有任何颗粒物,使用 0.5μm 或更小粒径的滤膜过滤。同时建议在色谱系统中使用在线过滤器。

样品溶液如果使用强溶剂(例如,流动相为水,样品溶剂为甲醇),为达到较好峰形,需要降低进样量(以 250x4.6mm 规格为例,小于 10μL)。

 

6、 流动相

   所有流动相,特别是含有缓冲盐的流动相,当日实验当日配制;如果使用了前日配制的流动相,请确保流动相 pH 值没有变化,并确保流动相没有长菌。

   流动相的 pH 值取决于您的应用和色谱柱填料类型。我们建议在所有的色谱柱上都仅使用 pH 范围为 2~8 的流动相(Hypercarb 可以使用 pH 为 1~14 的流动相);如果需要使用pH 更高(2~10)的流动相,请选用 Hypersil GOLD、Syncronis C18、Betasil C18 等色谱柱,并请尽量避免使用无机缓冲盐。

请尽量避免在常规流动相中使用很高比例的水(>95%)作为流动相,此类流动相仅适用于中等疏水的键合相,例如 Hypersil GOLD aQ、Aquasil C18、Syncronis aQ 等色谱柱。

所有流动相都需使用 2μm 滤膜过滤。

 

7、 色谱柱安装

请小心操作色谱柱。

不要摔、碰色谱柱,这样会损坏色谱柱床,使色谱柱性能下降。

使用合适的连接管路和接头,确保色谱柱连接处死体积降到zui低(使用不锈钢接头时需要尤其注意)。我们建议使用SLIPFREE 接头,此接头与Thermo色谱柱以及其他品牌色谱柱均匹配。

 

8、 色谱柱平衡

在进行分析之前,请使用至少 20 倍柱体积的流动相冲洗色谱柱,以使色谱柱达到平衡。

 

9、 色谱柱保护

    对于“脏”的样品以及组分未知的样品,请尽量使用在线滤器或保护柱,如果可能,使用 SPE 小柱对样品进行前处理是更好的选择。上述做法可以有效延长色谱柱使用寿命。

 

10、 色谱柱清洗

常规清洗:

在储存色谱柱之前,请使用至少 20 倍柱体积的不带缓冲盐的流动相冲洗色谱柱(去除缓冲盐),再用更强的溶剂冲洗色谱柱(去除强保留成分,反相色谱通常使用甲醇或乙腈),然后使用合适的溶剂储存色谱柱。

清洗强保留污染物:

使用如下试剂依次清洗色谱柱

20 倍柱体积不带缓冲盐的流动相;

20 倍柱体积甲醇或乙腈;

20 倍柱体积异丙醇;

20 倍柱体积正己烷或氯仿;

20 倍柱体积异丙醇;

20 倍柱体积甲醇或乙腈。

 

11、 色谱柱保存

    反相色谱柱,保存溶剂通常是含至少 30% 有机相的水溶液,也可在常规清洗后直接保存在有机相中。

    如果需要长时间储藏,则需要使用较高比例的有机相(有机相比例至少大于 50%,但不建议使用纯有机相)。

 

 

 

注意:如果违反上述规程,可能使色谱柱失去保修。

 

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