单克隆分离是建立稳定细胞系的重要环节，因而在现代生物技术和医药研发领域中应用广泛，构建稳定细胞系的常用方法有质粒转染法和病毒侵染法，两种方法都需要借助抗生素筛选，通过单细胞克隆分离获得稳定、遗传特性一致的细胞群。
通过单细胞克隆分离和抗生素筛选，获得表达效率高、整合稳定的细胞群，最终构建成稳定细胞系；而病毒侵染法则是通过将携带目的片段的病毒，常用的如慢病毒，转导入细胞，再通过单细胞克隆和抗生素筛选，获得稳定细胞系。
目前常规的单克隆分离技术主要包括有限稀释法、克隆环法和显微操作法。有限稀释法是通过将细胞悬液连续梯度稀释，使细胞培养板的一个孔中仅有1个细胞，再经过两周左右时间增殖，形成细胞群，再经过验证获得稳定克隆；克隆环法是通过在10-15cm的细胞培养皿中，将细胞接种低密度，使分散的单个细胞各自增殖成细胞群，用克隆环方式与周围的细胞隔离开，通过胰酶消化，转到新的孔板中继续培养扩增，并检测验证而获得稳定克隆；显微操作法是借助显微镜，在放大的视野下挑取单细胞，再转至培养孔中，逐渐扩增获得单克隆。
哺乳动物细胞通过分离、稀释接种，培养在适宜于单细胞生长的培养液中，形成细胞克隆，运用这项技术可以制作细胞成活曲线，即在接种相同数量细胞的培养瓶中，加入不同浓度的化学药品，或照以不同剂量的射线，观察其对细胞的听见害程度，由此可以在哺乳类细胞中进行诱变试验及分离突变细胞。
方法：
a、在培养皿中制备饲养细胞(小鼠腹腔细胞)单层。
b、临用前将2.0%琼脂糖生理盐水溶液与等量双倍浓度的HT培养液混匀，配成1%琼脂糖培养液，45℃水浴中温育。
c、吸去平皿上层培养液，加入1%琼脂糖培养液3ml，室温10分钟。
d、取杂交瘤细胞悬液1ml，加入1%琼脂糖培养液1ml混匀，铺于上层。
e、37℃、7.5%湿润培养7-14天，克隆生长至2mm时，用毛细吸管吸出克隆，直接转种于含有饲养细胞的24孔板，扩大培养。
f、吸取上清，检测抗体，阳性孔可继续克隆化，或扩大培养、冻存。
