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真菌基因组DNA提取试剂盒说明书|货号:D2300
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生产厂家北京索莱宝科技有限公司是一家从事生物学试剂及试剂盒的高科技生物企业。
总部位于北京,并在全国设有经销或代理机构。产品因可靠而稳定的质量和较为完善的售后服务确立了“Solarbio”良好的品牌形象。公司秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念,拥有专业的研发和质量检测团队以及*的仓储和物流系统。“Solarbio”已经得到全国科研工作者的认可,成为广大经销商推崇的。
公司拥有一批专业的研发人员,我们专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广,品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时,索莱宝公司提供各种常规生化试剂,库存常备产品多达10000多种,可随时为广大科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面,索莱宝谨记公司信念:质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程,科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序,我们恪守对每一位用户的承诺:用专业的态度做专业的品牌。同时,公司组建了一支专业的技术服务队伍,能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买索莱宝产品的用户都能够得到专业的咨询和完善的售后服务。
索莱宝公司坚持与接轨,注重和*企业的合作与交流,并提供产品代理、市场咨询等多项服务。公司将一如既往与世界更多合作,不断为广大生物科研工作者提供更优质的产品和服务。公司理念:“为科研服务,为生命尽责”。一个人能够走多远,取决于与谁同行。索莱宝公司期待与各同行精诚合作。
索莱宝诚招生物试剂研发人员,期待与广大同行精诚合作,为广大科研工作者提供优质的产品,高效的物流以及专业的售后服务。索莱宝感谢所有朋友的支持与帮助,您的支持是我们前进的动力和保障。让我们携手同行,共同创造美好的明天。
2016年索莱宝获得*认证。
真菌基因组DNA提取试剂盒说明书|货号:D2300
生产厂家:北京索莱宝
货号:D2300
规格:50T/ 100T
保存:室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期12个月,2℃-8℃保存时间更长。
真菌基因组DNA提取试剂盒内容:
RNase A、蛋白酶K、玻璃珠、溶液A、溶液B、漂洗液、洗脱液、吸附柱、收集管、说明书
真菌基因组DNA提取试剂盒说明: 真菌是具有真核和细胞壁的异养生物。种属很多,已报道的属达1万以上,种超过10万个。真菌通常又分为三类,即酵母菌、霉菌和蕈菌(大型真菌)。对于酵母菌和霉菌,可以用玻璃珠处理,而对于大型真菌,可直接用液氮研磨。经过前期处理的菌液,用硅质膜吸附,即可得到高纯度的基因组。提取纯化后的DNA,可以直接用于 PCR/Real time-PCR,sequencing,Southern blot,mutant analysis,SNP 等下游应用实验。
真菌基因组DNA提取试剂盒操作步骤: 使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、 样品的处理: 1)对于酵母菌,取1-2ml培养好的菌液,离心收集,弃上清。加入200ul 溶液A,加入20ul RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约5-10min。 2)霉菌(孢子也可相同处理):取50-100mg菌丝,加200ul溶液A,用玻璃研磨器适当研磨分散菌丝,加入20ul RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约30min。 3)大型真菌(如蘑菇等):称取50-100mg样品,倒入适量的液氮,立即研磨重复3 次,使样品研成粉末(如无液氮,可加200ul溶液A后用玻璃研磨器适当研磨),加200ul溶液A,加入20ul RNase A,再加入100mg玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约5min。
2、加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K,充分混匀,55℃水浴消化,30min。消化期间可颠倒离心管混匀数次,12000rpm离心2min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀,可再次离心。
3、在上清中加入200ul溶液B,充分混匀。如出现白色沉淀,可放55℃水浴5min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不*,可能导致提取的DNA量少及不纯,还有可能导致上柱后堵柱子,请增加消化时间。
4、再加入200ul无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,放置2分钟。
5、12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入500ul漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。 8、12000rpm离心2min,将吸附柱置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。
9、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜*悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm离心1min。
10、离心所得洗脱液再加入吸附柱中,室温放置2min,12000rpm离心2min,即可得到高质量的基因组DNA。
真菌基因组DNA提取试剂盒注意事项:
1. 由于真菌种类万千,对于一些特别难处理的真菌,可用液氮研磨,再用玻璃珠振荡,蛋白酶K处理,一般都可以得到一定量的基因组DNA,如电泳检测很弱,一般PCR都会有较好结果。
2. 若溶液A或溶液B中有沉淀,可在55℃水浴中重新溶解。
3. 如果DNA提取量很少,可加长玻璃珠处理时间,如果提取DNA成弥散短条带,可减少玻璃珠处理时间。
4. 洗脱缓冲液的体积好不少于50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH值低于7.0会降低洗脱效率;DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。
5. DNA浓度及纯度检测:得到的基因组DNA的片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA的片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。 6. 在确保样品无误的情况下,如经过多次试验,都无法提出DNA,请将部分样品寄至我公司,我们代为摸索优化条件,以使您的实验能够正常进行下去。
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