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PicaGreen(效果同PicoGreen)dsDNA 定量检测试剂盒

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北京索莱宝科技有限公司是一家从事生物学试剂及试剂盒的高科技生物企业。

总部位于北京,并在全国设有经销或代理机构。产品因可靠而稳定的质量和较为完善的售后服务确立了“Solarbio”良好的品牌形象。公司秉承“以客户为中心、以产品为保障、以诚信为基础、以创新为宗旨”的发展理念,拥有专业的研发和质量检测团队以及*的仓储和物流系统。“Solarbio”已经得到全国科研工作者的认可,成为广大经销商推崇的。

公司拥有一批专业的研发人员,我们专注于生物产品的不断完善和创新。产品覆盖面广,品质可靠。先后开发了涵盖分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物医学等领域的多种试剂及试剂盒。同时,索莱宝公司提供各种常规生化试剂,库存常备产品多达10000多种,可随时为广大科研工作者提供各类专业试剂。在质量方面,索莱宝谨记公司信念:质量高于一切。所有研发的产品都设有严谨的生产流程,科学的质量检测方法和成熟的质量检测程序,我们恪守对每一位用户的承诺:用专业的态度做专业的品牌。同时,公司组建了一支专业的技术服务队伍,能够为科研工作者提供专业的技术服务。每一位购买索莱宝产品的用户都能够得到专业的咨询和完善的售后服务。

索莱宝公司坚持与接轨,注重和*企业的合作与交流,并提供产品代理、市场咨询等多项服务。公司将一如既往与世界更多合作,不断为广大生物科研工作者提供更优质的产品和服务。公司理念:“为科研服务,为生命尽责”。一个人能够走多远,取决于与谁同行。索莱宝公司期待与各同行精诚合作。

索莱宝诚招生物试剂研发人员,期待与广大同行精诚合作,为广大科研工作者提供优质的产品,高效的物流以及专业的售后服务。索莱宝感谢所有朋友的支持与帮助,您的支持是我们前进的动力和保障。让我们携手同行,共同创造美好的明天。

2016年索莱宝获得*认证。

详细信息

 

                    

PicaGreen(效果同PicoGreendsDNA 定量检测试剂盒 *2000*

试剂组成:

 

产品名称:PicaGreen(效果同PicoGreendsDNA 定量检测试剂盒 *2000*

种类:试剂盒

供应商:北京索莱宝

试剂

体积

 

保存条件

保存期

Component A

PicoGreen 试剂

 

1ml 200× in DMSO

 

Solution in DMSO

4 ºC 避光

 

 

 

半年

Component B

TE

 

 

50mL

 

 

室温保存

Component c1ml 小牛胸腺DNA

 

1 mL

 

1ug/ml in TE Buffer

 

4 ºC 保存

PicaGreen(效果同PicoGreendsDNA 定量检测试剂盒 *2000*

操作步骤:

 

1、试剂制备

PicaGreen dsDNA Component A (定量试剂是以1mL 的浓缩液形式保存在无水的DMSO(二甲基亚砜)中。实验当天,配制2XPicoGreen 试剂的操作溶液,用1xTEComponent B1:200 的比例稀释浓缩液。如果要准备足够的操作溶液测定20 个样品,可在20mL1x TE Component B中加入100μLPicaGreen dsDNAComponent A 定量试剂。由于试剂容易吸附到玻璃表面,要在塑料容器中配制。PicaGreen 试剂(Component A )见光易降解,所以应将配好的溶液用箔包住或放置暗处避光保存。溶液在配制好数小时内使用,以保证*结果。

 

2 DNA 标准曲线

 

2.1 预备1μg/mLdsDNA Component c 贮存液于1x TE 中。根据在1cm 光程长度的比色杯中A260nm 时的吸光度确定DNA 浓度;相应于1μg/mLdsDNA 溶液A260=0.02。尽管任何纯化的dsDNA 制剂都可用来做标准曲线,但常用的是小牛胸腺DNA。用跟被检测的样品相似的DNA 做标准曲线,用或长或短的线型DNA 片段测定相近大小的酶切片段;质粒用于测定质粒DNA。然而大部分线状dsDNA 分子,不管其片段长度大小,都会产生大致相等的信号。PicaGreen 试剂测定法在通常污染核酸制剂的几种复合物存在的条件下仍能保持线状,尽管信号强度可能受到影响。因此,为了得到有效的对照处理,被用

来做标准曲线的dsDNA 溶液要用和实验样品相同的方式来处理,并且应该包含相同的可能存在的污染物。

 

2.2 要产生从0.5ng/mL 500ng/mL(见表1)单重复8 个点的标准曲线,在2X 终浓度下配制一系列的DNA 溶液,混合相同体积的2XDNA 2XPicaGreen 操作溶液,放入10×10mm 比色杯中。混合相同体积的1XTE 2XPicaGreen 操作溶液以备空白对照。避光于室温下放置2-5 分钟。

 

 

2XDNA 溶液浓度

ng/mL

2XDNA 溶液的体积

mL

2XPicaGreen 溶液的

体积(mL

PicaGreen 试剂测定中DNA 的终浓度(ng/mL)

1000

1

1

500

200

1

1

100

50

1

1

25

20

1

1

10

5

1

1

2.5

2

1

1

1

1

1

1

0.5

0

1

1

空白

 

1 10×10mm 比色杯时DNA 标准曲线

 

2.3 当用微量检测皿适配器时,PicaGreen 测定也可在较低的测定体积(50μL 200μL)内完成。欲产生从1ng/mL 100ng/mL(见表2)的标准曲线,在2X 终浓度下配制一系列的DNA 溶液,混合相同体积的2XDNA 2XPicaGreen 操作溶液,将至少50μL 溶液转移到微量检测皿中。确信不要在样品中引入气泡,轻轻地弹微量检测皿的外部经常可以驱散气泡。避光于室温下放置2-5 分钟。

 

2X DNA 溶液浓度

ng/mL

2X DNA 溶液的体积

uL

2X PicaGreen 溶液的体积(uL

PicaGreen 试剂测定中DNA 的终浓度(ng/mL)

200

30

30

100

50

30

30

25

20

30

30

10

5

30

30

2.5

2

30

30

1

0

30

30

空白

 

2 用微量检测皿时DNA 标准曲线

 

2.4孵育后用合适的荧光计测量样品荧光值。选择蓝色激发光,用荧光值zui大的样品校正仪

器。

 

2.5 测量剩余样品的荧光值。不同的微型荧光计将给出一个直接的浓度读数,数据可以用来产生DNA 浓度的标准曲线,下面以TBS-380 微型荧光计为例。

 

 

 

 

 

 

             1     PicaGreen 标准曲线

3、样品分析

3.1 1X TE 稀释未知DNA 样品至需要的体积(10×10mm 比色杯需1.0mL,微量检测皿需25-100μL)。对样品高度稀释可以确保任何污染物都被zui大限度地冲淡。然而,也要避免取样体积太小而无法精确吸取的情况。去除样品中RNA ssDNA 参照4 部分。

3.2 在每个样品中加入2XPicaGreen 试剂的操作溶液(3.1 节准备),混合好,将混合物移入合适的比色杯,避光于室温下放置2-5 分钟。

3.3 可以对样品进行不同的稀释处理重复测定以确保结果的准确性。

 

4 去除样品中单链核苷酸

 

ssDNA dsDNA 等摩尔浓度时,后者的测定受前者的干扰很小。前者浓度10 倍于后者时,。对荧光信号的干扰也不过10%。但当DNA 浓度低时,ssDNA 能产生较大干扰在高浓度时,由RNA 结合PicaGreen 试剂产生的荧光值用RNA酶处理样品可消除。RNA A、酶T1 结合核酸酶S1 能除去所有单链核酸,从而保证样品荧光值是由dsDNA 产生。(具体做法请查阅相关的参考文献)

 

 

参考文献:

[1] Nucleic Acids Res. 24, 2623 (1996)

[2] BioTechniques 21, 372 (1996)

[3] BioTechniques 21, 664 (1996)

[4] Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93, 6091 (1996)

[5] Anal. Biochem. 102, 344 (1980)

[6] Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, J. Sambrook, E.F. Fritsch and

T. Maniatis, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York (1989)

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