一.MDCK细胞无血清培养基 产品用途 

用于MDCK细胞的培养。在整个培养过程中不需要添加血清。可达到原来的DMEM+10%血清的效果。

提请注意：
1. 该产品为无血清培养基产品。不是添加了血清的细胞培养基。
2. 细胞可直接转入无血清培养基中培养，不需要经过血清浓度逐步降低的过程，不需细胞驯化。细胞可直接转入无血清培养基中培养，不需要经过血清浓度逐步降低的过程，不需细胞驯化。

二. MDCK细胞无血清培养基  产品规格 

500ml/瓶。20瓶/箱。

三.MDCK细胞无血清培养基  产品性能

1. MDCK细胞培养基中加入了胰岛素、转铁蛋白、白蛋白以及所需要的贴壁因子等物质，其化学成分明确。在整个培养过程中不需要添加血清。

2. 细胞连续传代32代，细胞特性没有改变。

3. 细胞倍增时间小于16小时。

4. 细胞刚转入无血清细胞培养基时，生长相比*培养基略有迟缓，经过2-3代的传代后，生长即可达到*培养基（90％DMEM+10％胎牛血清）所培养的水平。

四.MDCK细胞无血清培养基  使用说明

此产品的使用方法跟*培养基（DMEM+10%FBS）的相同。
不经过血清驯化的MDCK细胞，前5代左右（与MDCK细胞的初始状态有关）状态可能会稍差。

1、MDCK细胞复苏
1）从液氮罐中取出冻存管迅速置于37℃水浴锅中，使管中的液体在1min内融化。
2）在超净工作台中用无菌吸管吸取10mL预温的MDCK无血清培养基到15mL离心管中，冻存管用75%酒精擦拭表面后，将细胞悬液加入 15mL离心管中，吹吸混匀。
3）800rpm离心3min，去除上清液，用6mL预温的无血清培养基重悬细胞，接种于T25细胞培养瓶中，接种细胞密度为5×10⁵cells/mL。
4） 37℃,5%CO2 培养箱中培养，次日更换一次培养液，继续培养1-2天至细胞铺满瓶底的80%-90%进行传代。

2、MDCK细胞传代（以T25瓶为例）
1）处于对数生*的细胞长至融合度达到80％-90％时，弃去培养液，用PBS或不含钙镁的Hank's液清洗细胞3遍。
2）加入1mL基因重组胰蛋白酶，37℃,5%CO2培养箱中消化至细胞收缩变圆，轻拍培养瓶，镜下可观察到细胞移动加入培养基终止消化。
3）如果以1：6比例传代，加入35mL MDCK无血清培养基。如果以1：4比例传代，需加25mL MDCK无血清培养基。
​4）分瓶后，置于37℃，5% CO2培养箱中培养，细胞长满瓶底80%-90%后进行下一次传代（一般2-3天传代一次）。

3、流感病毒的分离与培养
1） 选取融合度90％-100％且处于对数生*的MDCK细胞，弃去培养液，用PBS或不含钙镁的Hank’s液清洗细胞2-3遍。
2）加入200 μL的流感病毒样本，温和摇动数次。
3）置于37℃，5% CO 培养箱中吸附1-2小时。
4）吸出接种物，加入6 mL流感病毒分离无血清培养基（使用前需要添加抗生素及终浓度为2ug/mL的TPCK-胰酶）于培养瓶中，放置 于33℃-35℃，5%CO2 培养箱中培养，每日观察病变。
5）当75%-*的细胞出现病变时即可准备收获病毒。
6）温和摇动细胞瓶2-3次。将培养瓶中的病毒液置于15mL离心管中。
7）为了提高病毒滴度，可将离心管置于-70度冰箱或液氮上方反复冻融一到两次。
8）收获的病毒液可立即进行血凝试验，或负80度冰箱冷冻*保存。

4、MDCK细胞冻存
1）选取融合度达80%-90%且处于对数生*的MDCK细胞用于冻存。
2）依据传代方法把消化好的细胞收集于离心管并计数，800rpm离心3min。
3）去除上清液，加入商品化的细胞冻存液（冻存液需要提前预冷），冻存液中细胞的密度为5×10⁶ cells/mL。用吸管轻轻吹打使 细胞混匀，然后分装至无菌冻存管中，每支冻存管加液1mL。
4）细胞经过程序降温后置于液氮中保存。（如用yocon无血清冻存液，无需程序降温，直接-80℃冻存，12h后存入液氮，*保存。）

五.MDCK细胞无血清培养基  实验数据

	MDCK细胞在无血清培养基中 的培养状态（200×镜下）		MDCK细胞在需血清培养基中 ​的培养状态（200×镜下）
	MDCK细胞在无血清培养基中传代第10代		MDCK细胞在无血清培养基中传代第20代
	MDCK细胞在无血清培养基中传代第30代		MDCK细胞在无血清培养基中传代第32代