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HBsAgGi抗体/HBsAgGi ELISA试剂盒
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生产厂家乙型肝炎病毒特异性检测
HBsAgGi抗体 & HBsAgGi ELISA试剂盒
◆HBsAgGi HBs抗原的糖链异构体
本产品是针对M-HBs的O型糖链修饰的PreS2的单克隆抗体,可特异性识别含有DNA的传染性病毒颗粒。
关于乙肝肝炎病毒及HBsAgGi
乙型肝炎病毒(HBV)作为一个全球性的健康问题,是传染性zui强的病毒之一。
HBV包膜蛋白由三种表面抗原S-、M-和L-HBs组成,它们由含有PreS1、PreS2和S-结构域的HBsAg基因产生1。 HBsAg被 N-聚糖和 O-聚糖高度糖基化2,3。全聚糖结构分析显示,PreS2结构域中,只有在M-HBs上含有基因型C (gC) 中所包含的高度保守的O-糖基化位点,而L-HBs上却没有4,5。
HBsAgGi,是能与HBsAg的糖链异构体相结合的重组单抗,其使用含有O型糖链的PreS2糖肽制备所得。与传统的识别全部病毒颗粒的HBsAg检测相比,HBsAgGi抗体可以特异性识别传染性HBV颗粒(DNA病毒粒子)。
产品信息
HBsAgGi Recombinant mouse IgG1, 50μg
产品编号 | 635-54381 |
对应基因分型 | Genotype C |
同种型(isotype) | 小鼠IgG1 |
轻链 | Kappa(κ) 型 |
包装 | 50 μg |
用途 | 1.WB 2.HBV颗粒的免疫沉淀/分离 3.ELISA 4.HBV感染抑制测定 5.免疫组化 |
保存方法 | 短期请保存于4℃,长期请保存于-20℃,避免冻融。 |
HBsAgGi可特异性识别HBV颗粒中的M-HBsAg
HBV由衣壳蛋白质(HBsAg),HBV核心,HBV DNA组成。HBsAg的基因由PreS1(蓝),PreS2(红),S(黑)三个领域组成。S-HBsAgs约一半都被N型糖链所修饰,其余不含糖链。而M-HBsAg的PreS2结构域被O型糖链高度修饰,但L-HBsAg在同一位点却几乎不会被修饰。S-HBsAg存在数量最多,非传染性颗粒大部分由S-HBsAg所构成。而传染性HBV颗粒内核含有HBV DNA,被由所有类型的HBsAg所形成的衣壳所包裹。HBsAgGi可特异性的识别在乙肝分型c型M-HbsAg中所*的O型糖链修饰PreS2领域。
HBsAgGi与基于S抗体的HBV颗粒识别
HBV患者的血清中含有的HBV DNA的传染性颗粒比非传染性颗粒要多得多。抗S抗体会对包括非传染性颗粒在内的所有HBV颗粒进行识别,而相比之下,HBsAgGi由于是识别含有M-HBsAg的传染性HBV颗粒,因此HBsAgGi检测不同于S抗体检测,可更准确地识别HBV患者。
在HBV感染患者的血清中,大部分(超过99.9%)的HBV颗粒是亚病毒颗粒(SVP),主要是S-HBs。相比之下,感染性颗粒(DNA 病毒粒子)在整个 HBV颗粒中含量比例不到0.1%。HBsAgGi可以从众多HBV颗粒中,高效区分含DNA颗粒的糖肽结构(粉色标记)。
HBsAgGi 和其他检测HBV的标志物对比
下表对HBV标志物进行了对比。qHBsAg和HBV-DNA是传统标志物,而HBcrAg和 HBV-RNA是新型标志物。列于表中的是目标HBV颗粒或分子。〇代表标志物可检测的颗粒或分子,×代表无法识别此标志物,或不推荐使用。
HBsAgGi 可检测含有 M-HBsAg 的颗粒,例如 DNA 或 RNA 病毒粒子。
应用实例
使用 HBsAgGi(左)和 PreS2(右)抗体进行Western Blot
| ・左: HBsAgGi-gC (RCA-001),右: anti-PreS2 antibody ・Lane1: S-HBs (CHO) 50 ng ・Lane2: M-HBs (HEK293) 50 ng ・Lane3: L-HBs (yeast) 50 ng ・Lane4: serum (HBV patient) 1 μg ・二抗: HRP-labeled anti-mouse IgG |
HBsAgGi-gC(左)可以检测出M-HBs但不能检测L-HBs。而市售的PreS2抗体(右)对L-HBs的识别能力很强,对M-HBs的识别能力很弱。在HBV患者的人血清中,HBsAgGi-gC特异性识别M-HBs,而PreS2抗体识别M-HBs和L-HBs。
使用HBsAgGi-gC 包被的ELISA板 (RCEK-001) 和重组M-HBsAg 作为标准品进行ELISA法检测
| ・标准品: M-HBs (3.7 900 ng/mL) ・检测样品: HBV患者血清 (2 µL) ・血清 #1: HBsAg 6610 IU/mL, HBV DNA 3.1 ・血清 #2: HBsAg 8612 IU/mL, HBV DNA 0 ・血清 #3: HBsAg 36600 IU/mL, HBV DNA 8.3 ・检测:生物素化 HBsAgGi-gC 抗体和 HRP 标记的链霉亲和素 |
ELISA板用HBsAgGi-gC包被,用HEK293细胞中表达的M-HBs制备标准曲线。HBV患者的血清(#1-3)经稀释(100 µL中含有2 µL血清)并在同一ELISA板上进行测量。HBsAgGi-gC也可以检测NUC处理后的血清样本(HBV DNA=0)。
使用 HBsAgGi-gC 进行免疫沉淀
| ・原始样品: HBV 患者血清 (4.1 logIU/20 μL) ・免疫沉淀条件:生物素化 HBsAgGi-gC (RCA-001) 2 μg, ・链霉亲和素偶联磁珠10 μL/1 mL TBS-T, 4°C, 16 hours ・HBV DNA 的定量:通过实时 PCR 检测20 μL 沉淀部分 ・(免疫沉淀) 和上清部分 (Sup) 中的 HBV DNA。 |
将HBV颗粒稀释至1 mL (4.1 logIU/20 μL) 并通过HBsAgGi-gC沉淀。在这种情况下,HBsAgGi-gC可以收集含有HBV DNA的HBV颗粒。
◆HBsAg糖链异构体检测用HBsAgGi ELISA试剂盒
本ELISA试剂盒含有可检测M-HBs的O型糖链糖基化修饰PreS2的单抗,可检测含有DNA的病毒颗粒。
试剂盒规格
产品编号 | 638-54371 |
对应基因分型 | Genotype C |
包装 | 96 Test |
组成
HBsAgGi 包被96孔板:96 孔 (8孔板×12) | |
M-HBsAg标准品 (1 mL) | HRP标记HBsAgGi (10 mL) |
稀释液 (24 mL) | TMB底物 (11 mL) |
20X 洗涤液 (50 mL) | 终止液 (12 mL) |
ELISA使用方法
步骤1:HBV DNA颗粒首先被HBsAgGi抗体捕获。
步骤2:洗涤后,ELISA微孔上捕获的HBV颗粒将与HRP标记的HBsAgGi抗体进一步反应。
步骤3:进一步洗涤后,将HRP底物(TMB底物)加入孔中。孵育后,停止反应并测量450nm处的吸光度数值。
标准曲线
将试剂盒中所包含的标准品 M-HbsAg(800ng/mL)梯度稀释,调整为标准M-HBsAg(6.25~400ng/mL)溶液,制作标准曲线。
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使用HBsAgGi ELISA试剂盒进行血清中HBsAgGi检测
检测样本:HBV患者3名的血清(1 µL),每个样本分别进行6次实验 标准M-HBsAgs (6.25 - 400 ng/mL) |
样品 | qHBsAg (IU/mL) | HBsAgGi (µg/mL) | CV (%) |
血清 #1 | 2100 | 4.5 | 2.52 |
血清 #2 | 8200 | 8.92 | 2.65 |
血清 #3 | 2200 | 11.04 | 1.82 |
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