Human IL-23 ELISA Kit

用途：人IL-23 ELISA试剂盒用于体外定量检测人血清，血浆，缓冲液或细胞培养液中的白介素23。此试剂盒只用于科研，不能用于诊断。

检测原理：

IL-23试剂盒应用的是夹心法固相酶联免疫吸附分析法（ELISA）。IL-23特异单克隆抗体被包被于微孔板上，已知IL-23浓度的标准品和未知浓度的样品可在此反应孔中进行检测。先将IL-23抗原和生物素标记IL-23特异单克隆抗体同时孵育。洗涤后加入亲和素过氧化物酶，孵育后洗去未结合的酶。其后加入底物，产生颜色反应，颜色的深浅与样品中IL-23的浓度成一定的比例关系。

试剂盒组成及配制：

自备材料：

蒸馏水；加样器：10ul, 50ul, 100ul, 200ul, 1000ul; 漩涡振荡器和磁力搅拌器

保存条件：

试剂盒保存于2-8度，

洗涤缓冲液：制备好后，2-8度可保存1周以上

标准品：制备好后即用，不要保存。

生物素标记二抗：制备好后即用，不要保存。

亲和素-HRP: 制备好后即用，不要保存。

样品收集，处理和保存：

1.       细胞培养上清：1000xg离心10分钟去除颗粒和聚合物。

2.       血清——操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000xg离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

3.       EDTA，柠檬酸盐和肝素血浆可用于检测。1000Xg离心30分钟去除颗粒。

4.       如果样品不直接使用，将其分为小部分（250-500ul）-70℃下保存，避免反复冻融。

如果可能，不要使用溶血和高脂血。如果血清中有大量的颗粒，检测前先离心或过滤。

注意：不要在37℃或56℃加热解冻。在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻

实验方案：

用前所有试剂置于常温

试剂准备：

1.  洗涤缓冲液（200x）的稀释：蒸馏水200倍稀释成1X的工作液。

2.  标准品稀释液的制备：用10X的标准品稀释液储液加入225ml蒸馏水。稀释后的溶液可在2-8度保存一周。

3.  标准品的制备：按标准品瓶上的说明，加入标准品稀释液，稀释后浓度为5000pg/ml。温柔上下颠倒混匀。直接在检测板上对校准品做系列稀释，浓度范围：5000-156.25pg/ml。每次重新做实验，都需要重新做标准曲线。吸取200ul重悬后的标准品到A1, A2孔（5000pg/ml），取100ul标准品稀释液到B1, B2, C1, C2, D1,D2, E1,E2, F1, F2孔。从A1, A2孔吸取100ul到B1, B2孔，用加样器反复吸排使其混合。小心不要擦到孔的内表面。同样从B1, B2孔吸取100ul到C1,C2；再从C1,C2到D1,D2等，从最后的两个孔（F1, F2）中吸去100ul不要。这样从A1,A2到F1,F2，IL-23标准品稀释液的浓度为5000pg/ml到156.25pg/ml。也可在试管中进行此稀释，将稀释后的标准品直接加入反应孔中。

4.  生物素标记IL-23抗体的制备：

   生物素标记抗IL-23的稀释：每次实验前准备。根据实验的孔数，以生物素标记抗体稀释液稀释。稀释量见下表。

5.  亲和素-HRP的稀释：5ul 亲和素-HRP加入0.5ml HRP稀释液, 每次实验前准备，不要保存此稀释后液体。根据反应孔的数量进一步稀释，见下表。

检测程序

使用前，将所有试剂充分混合，不要使液体产生泡沫。根据样品数量加上空白，标准品决定所需的板条，每个样品，标准品，空白和质控都应做双份。

结果分析

以吸光度为Y轴，相应的IL-23标准品浓度为X轴做标准曲线。样品的IL-23含量可根据其O.D.值由标准曲线推断出来。

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