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AtT20,小鼠垂体瘤细胞
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产品名称:AtT20,小鼠垂体瘤细胞
规格:5×1000000cells/瓶
产品运输方式:干冰或者活体细胞运输,保证细胞运输中的存活率。
特点:细胞代数为3-5代左右。
包装:内层无菌自封袋、防压泡沫盒、外层防压保温气泡袋、说明书。
产品用途:仅用于科研实验
价格:电询/询价。
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细胞的冻存和复苏:
一、原理
在不加任何条件下直接冻存细胞时,细胞内和外环境中的水都会形成冰晶,能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等,能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂,可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。
细胞复苏时速度要快,使之迅速通过细胞zui易受损的-5~0℃,细胞仍能生长,活力受损不大。
目前常用的保护剂为二甲亚砜(DMSO)和甘油,它们对细胞无毒性,分子量小,溶解度大,易穿透细胞。
二、操作步骤
(一)冻存
1、消化细胞(同实验二),将细胞悬液收集至离心管中。
2、1000rpm离心10分钟,弃上清液。3、沉淀加含保护液的培养,计数,调整至5×106/ml左右。
4、将悬液分至冻存管中,每管1 ml。
5、将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口,封口一定要严,否则复苏时易出现爆裂。
6、贴上标签,写明细胞种类,冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。
7、按下列顺序降温:室温→4℃(20分钟)→冰箱冷冻室(30分钟)→低温冰箱(-30℃ 1小时)→气态氮(30分钟)→液氮。
注意:操作时应小心,以免液氮冻伤。液氮定期检查,随时补充,不能挥发干净,一般30立升的液氮能用1~1.5月。
(二)复苏
1、准备一个茶缸或1000ml的烧坏,内装2/3杯37℃的温水。
2、从液氮中取出冻存管、迅速置于温水中并不断搅动。使冻存管中的冻存物在1分钟之内融化。
3、打开冻存管,将细胞悬液吸到离心管中。
4、1000rpm离心10分钟,弃去上清液。
5、沉淀加10ml培养液,吹打均匀,再离心10分钟,弃上清液。
6、加适当培养基后将细胞转移至培养瓶中,37℃培养,第二天观察生长情况。
三、试剂和器材
器材:液氮罐、冻存管(塑料螺口冻存管或安瓿瓶)、离心管、吸管、离心机等
试剂:0.25%胰酶、培养基、含保护剂的培养基(即冻存液)
附:冻存液配制:
培养基加入甘油或DSMO,使其终浓度达5—20%。保护剂的种类和用量视不同细胞而不同。配好后4℃下保存。
其他优质细胞供应:
人乳腺上皮细胞HMT-3522 S1人乳腺癌细胞AU565
人乳腺癌细胞BT-20人乳腺癌细胞BT474
人乳腺癌细胞BT483人乳腺癌细胞BT549
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人乳腺癌细胞EFM-192A人乳腺癌细胞EFM-192B
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人乳腺癌细胞MDA-MB-453人乳腺癌细胞MDA-MB-468
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人乳腺癌细胞SUM 102PT人乳腺癌细胞SUM 1315M02
人乳腺癌细胞SUM 149PT人乳腺癌细胞SUM 159PT
人乳腺癌细胞SUM 190PT人乳腺癌细胞SUM 44PE
人乳腺癌细胞SUM 52PE人乳腺癌细胞T47D
人乳腺癌细胞UACC893人乳腺癌细胞VP229
人乳腺癌细胞VP267人乳腺癌细胞VP303
人乳腺癌细胞ZR-75-1人乳腺癌细胞UACC-893
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人乳腺导管癌细胞MDA-MB-175VII人乳腺导管癌细胞MDA-MB-435S
人乳腺导管癌细胞ZR-75-30人乳腺导管瘤细胞UACC812
人乳腺上皮细胞DU4475人乳腺腺癌细胞CAMA-1
人乳腺腺癌细胞HCC1428人乳腺腺癌细胞SK-BR-3
人乳腺原发性导管癌HCC1500人乳腺原发性导管癌HCC1599
人乳腺原发性导管癌HCC202人乳腺原发性导管癌HCC38
人乳腺原发性导管癌细胞HCC1937人正常乳腺上皮细胞MCF10A