HK ELISA

HK ELISA样品收集、处理及保存方法：血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。检测对象:人血清/血浆及相关液体实验方法:双抗原夹心法进行测

ELISA试剂分类: RD试剂盒，GBD试剂盒，IBL试剂盒

  2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
  3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
  4、 保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。
不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

上海乾思生物科技代理**进口试剂盒，经销众多生命科学领域的ELISA试剂盒，生化试剂，标准品，抗体，培养基，血清，为中国科研试剂供应商之一，质量被全国各大院校科研机构认可，
并为Elisa试剂盒长期供应商.

上海乾思生物科技有限公司特别供应进口分装elisa检测试剂盒，规格48T/96T，2-8℃保存，快递运输。上海乾思生物成立于2007年，生产经营进口分装的试剂盒产品，有人试剂盒、大鼠试剂盒、小鼠试剂盒、鸡试剂盒、鸭试剂盒、豚鼠试剂盒、牛试剂盒、兔子试剂盒、羊试剂盒、山羊试剂盒、绵羊试剂盒、鱼试剂盒、猪试剂盒，并且提供试剂盒代测技术服务等。

乾思生物科技有限公司

Shanghai biobaiye Biotech Co.,Ltd

供应人elisa试剂盒、大鼠elisa试剂盒、小鼠elisa试剂盒、兔elisa试剂盒等。标本有：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。

种属：人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。

常用生化试剂作用：   

1、蛋白酶K：能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，在尿素和SDS中稳定。一般工作浓度是50—100μg/ml，推荐反应缓冲液：50mM Tris-HCl （pH7.5）,10mM CaCl2。

2、SDS：十二烷基硫酸钠，溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀。

3、IPTG：异丙基-β-D-硫代半乳糖苷， 常用于蓝白斑筛选及IPTG诱导的细菌内的蛋白表达等。IPTG和乳糖的结构相似，所以它和乳糖一样，可以与乳糖操纵元的阻遏蛋白结合，

使阻遏蛋白的空间构像变化，四聚体解聚成单体，失去与操纵子特异性结合的能力，从而解除了阻遏蛋白的作用，使其后的基因得以转录合成利用乳糖的酶类。与乳糖不同的是，

IPTG不被 β-半乳糖苷酶水解。常与X-GAL一起用于蓝白斑筛选。作用*的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定。

4、X-gal：5-溴-4-氯。

样品收集、处理及保存方法：血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。检测对象:人血清/血浆及相关液体实验方法:双抗原夹心法进行测

ELISA试剂分类: RD试剂盒，GBD试剂盒，IBL试剂盒

  2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
  3、 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
  4、 保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。
不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

上海乾思生物科技代理**进口试剂盒，经销众多生命科学领域的ELISA试剂盒，生化试剂，标准品，抗体，培养基，血清，为中国科研试剂供应商之一，质量被全国各大院校科研机构认可，
并为Elisa试剂盒长期供应商.

上海乾思生物科技有限公司特别供应进口分装elisa检测试剂盒，规格48T/96T，2-8℃保存，快递运输。上海乾思生物成立于2007年，生产经营进口分装的试剂盒产品，有人试剂盒、大鼠试剂盒、小鼠试剂盒、鸡试剂盒、鸭试剂盒、豚鼠试剂盒、牛试剂盒、兔子试剂盒、羊试剂盒、山羊试剂盒、绵羊试剂盒、鱼试剂盒、猪试剂盒，并且提供试剂盒代测技术服务等。

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供应人elisa试剂盒、大鼠elisa试剂盒、小鼠elisa试剂盒。

注：
1.  试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。
3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。
5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
    如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。
洗板方法
1.  手工洗板方法：吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需要，重复此过程数次。
2.  自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
  以标准物的浓度为纵坐标(对数坐标)，OD值为横坐标(对数坐标)，在对数坐标纸上绘出标准曲线。推荐使用专业制作曲线软件进行分析，如curve expert 1.3，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
 ◇      注意事项：
收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本，储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时，-20℃可保存1个月。-70度可保存6个月。部分标本需添加抑肽酶。
◇      液体类标本
标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血浆。每个标本量收集体积＝100ul×检测种类。
◇      血清：
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
◇      血浆：
应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入10％(v/v)抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
◇      尿液、胸腹水、脑脊液：
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
◇      细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
◇      组织标本：
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清置于-20度或- 70度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
寄标本时需注明以下情况：
标本编号；2、所测项目；3、是否做复孔