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3.2 酶联物（结合物）结合物即酶标记的抗体（或抗原），是ELISA中zui关键的试剂.良好的结合物应该是既保有酶的催化活性，也保持了抗体（或抗原）的免疫活性.结合物中酶与抗体（或抗原）之间有恰当的分子比例，在结合试剂中应尽量不含有或少含有游离的（未结合的）酶或游离的抗体（或抗原）.此外，结合物尚要有良好的稳定性.3.2.1酶用于ELISA的酶应符合以下要求：纯度高，催化反应的转化率高，专一性强，性质稳定，来源丰富，价格不贵，制备成酶结合物后仍继续保留它的活性部分和催化能力.在受检标本中不存在相同的酶.另外，它的相应底物易于制备和保存，价格低廉，有色产物易于测定等.在ELISA中，常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosohatase, AP).在少数商品ELISA试剂中，应用的酶尚有葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等.国产ELISA试剂一般都用HRP制备结合物.HRP是一种糖蛋白，含糖量约为18%，分子量为44000，是一种复合酶，由主酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合而成，是一种卟啉蛋白质.主酶无色糖蛋白在275nm波长处有zui高吸收峰，辅基是深棕色的含铁卟啉环，在403nm波长处有zui高吸收峰.HRP的纯度用RZ(Reinheit Zahl，德文，意为纯度数）表示，是403nm的吸光度与280nm吸光度之比，高纯度的HRP的RZ≥?.0.HRP除符合上述的ELISA中标记酶的要求外，更有价格低廉和性质较稳定的特点.值得注意的是，在选用酶制剂时，除其纯度RZ外，更应注意酶的活力.高纯度的酶如保存不当，活力也会降低.酶制剂的活力以所含的酶活力单位表示，可用对底物作用后生成产物量的测定进行试验.

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