生物体组织透明化新技术SCALEVIEW®-A2

　　宮脇敦史博士等人开发了一种水溶状态下不会损坏荧光蛋白，可简便使生物体组织透明化的方法。

　　对于福尔马林固定的样本，SCALEVIEW^®-A2是不破坏其光吸收和荧光，同时可减少光散射的水溶性溶液。仅需将哺乳类动物大脑等生物体组织浸泡于SCALEVIEW^®-A2中，即可透明化。SCALEVIEW^®-A2光学特性——折射率ne（20℃）为1.377-1.381。

HP数据：理化学研究所 脑科学综合研究中心细胞机能探索技术开发小组濱裕先生、宮脇敦史提供

合作：奥林巴斯（Olympus）株式会社

参考文献：Hama,H.et al. : Nature Neuroscience 14, 1481(2011).

◆SCALEVIEW^®-A2 操作

以透明化小鼠大脑为样本，SCALEVIEW^®-A2透明化方法操作如下：

1.　固定

①　用4% 多聚甲醛(PFA)/PBS（pH 7.5～8.0）对小鼠进行灌流固定。

②　取出小鼠大脑后，用4%PFA/PBS固定（4℃、10h）， 20% 蔗糖/PBS置换（4℃、24h）。

③　用OCT复合物对小鼠大脑进行包埋处理后，液氮进行冷冻。

④　用PBS对冷冻脑组织解冻、清洗后，再用4% PFA/PBS进行再固定（室温、20min）

2.　透明化处理

⑤　将固定好的小鼠大脑浸泡在SCALEVIEW^®-A2中（室温）。

注意点：
　　１．每个成年小鼠大脑需要使用30mL以上的SCALEVIEW^®-A2。

　　２．透明化需要1周以上时间。浸泡过程中，需在混匀器等设备中慢慢轻晃溶液。每天更换一次SCALEVIEW^®-A2溶液，效果更佳。

　　３．通过SCALEVIEW^®-A2溶液浸泡后，小鼠大脑体积会单方向膨胀10~30%水平。

3.　观察

⑥　观察SCALEVIEW^®-A2处理后的小鼠大脑样品使用双光子激光显微镜、奥林巴斯（Olympus）公司XLPLN25SVMP多光子物镜。或使用激光共聚焦显微镜进行观察。

⑦　观察结束后，可将小鼠大脑再次浸泡于SCALEVIEW^®-A2溶液中，保存温度4℃。

◆SCALEVIEW^®-A2处理案例

图1. SCALEVIEW^®-A2透明化小鼠大脑案例

从左往右： SCALEVIEW^®-A2处理前的小鼠大脑；SCALEVIEW^®-A2浸泡两周后的小鼠大脑

◆SCALEVIEW^®-A2观察案例

图2. 双光子激光显微镜下获取的Thy1-H小鼠大脑深层观察图像

使用奥林巴斯（Olympus）公司XLPLN25XWMP多光子物镜观察图像

比例尺：50 μm

图3. 双光子激光显微镜下获取的Thy1-H小鼠大脑深层观察图像

使用奥林巴斯（Olympus）公司XLPLN25XSVMP（NA.1.0 WD4 mm）多光子物镜观察图像

图4. 激光共聚焦显微镜下获取的小鼠胰脏透明化图像

　　对小鼠进行灌流固定处理前，先使用Lectin Texas red对流入血管进行标记处理。灌流固定后，取出胰脏并用SCALEVIEW^®-A2进行处理。图为奥林巴斯（Olympus）公司物镜：UPLSAPO30XS观察下的图像。

生物体组织透明化新技术SCALEVIEW®-A2