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DZ-009 猪瘟病毒诊断的高敏配对单抗
高级会员第8年
生产厂家山东蓝都生物科技有限公司成立于2015年,秉承“品质至上、客户第一、追求ZHUOYUE”的生产服务宗旨,“自强不息、艰苦奋斗、务实创新、追求ZHUOYUE”的精神,不忘初心,目标坚定,做BEST产品,服务于行业客户。食品安全检测事业部现有保健品类、激素及类固醇类、重金属类、喹恶啉类、消炎镇痛类、水产违禁类、牛羊马类、农药DU品类、禽病类、生理活性物、体外诊断IVD炎症、细菌含传染病类等多个品种。
主要产品有真菌毒素免疫亲和柱、真菌毒素嵌合酶联免疫检测试剂盒、真菌毒素胶体金定性检测卡、量子点定量检测卡、食品安全定量/定性检测箱、食品安全抗原及单克隆抗体、单克隆及多克隆抗体制备试剂耗材及相关仪器、食品安全与动物疫病类抗原及单克隆抗体等约1200种,部分产品已经出口到德国、俄罗斯、伊朗、英国、美国等多个国家。
地址:山东省滨州市国家经济技术开发区黄河二路376号
邮编:256600
用于猪瘟病毒诊断的高敏配对单抗上市
猪瘟病毒是ssRNA病毒,黄病毒科瘟病毒属,其RNA为单股正链。病毒粒子呈圆形,大小为38~44nm,核衣壳是立体对称二十面体,氯化铯中浮密度1.15~1.17g/ml,有包膜。猪瘟病毒在细胞质内复制,不能凝集红血球,与牛腹泻病毒有相关抗原。该病毒对**敏感,对温度、紫外线、化学消毒剂等抵抗力较强。
猪瘟病毒能在猪胚或乳猪脾、肾、骨髓、淋巴结、白血球、结缔组织或者肺组织的细胞中培养,但在这些细胞上不产生明显病变。可利用鸡新城疫病毒强化试验(END试验)测定猪瘟病毒,作为诊断猪瘟的一种方法。
临床诊断方法有:1.动物接种试验易感猪接种是检测猪瘟病毒的敏感方法。采取发病猪的血液或病死猪的淋巴结、脾脏、扁桃体等组织制成乳剂,无菌处理后接种易感猪(10-20Kg),观察发病情况,然后再分离病毒。通常采用兔体交叉免疫试验。2、检测血清抗体检测血清抗体可为猪瘟免疫提供依据,特别是酶联免疫吸附试验对检测非典型猪瘟和温和性猪瘟有重要作用。3、检测猪瘟病毒直接免疫荧光抗体技术是检测猪瘟病毒的一种快速诊断方法,该方法是采取猪的扁桃体或者猪肾、脾等组织做冰冻切片或触片,经丙酮固定,荧光抗体染色,在荧光显微镜下观察,如果这些组织细胞内发现有亮绿色荧光,说明细胞内存在猪瘟病毒,即可诊为猪瘟。
应市场需要,我们山东绿都生物食品安全检测事业部历时2年时间,开发了38株抗猪瘟鼠单抗,经过配对测试,找出1组可以配对成功,并投入了市场进行临床验证。
二,目的意义
1,所开发试纸条产品用于检测各厂家猪瘟活疫苗中有效抗原的含量,指导客户与有关监督部门考核产品。
2,所开发试纸条产品用于临床病料的猪猪瘟病毒诊断,可用于扁桃体或者猪肾、脾等组织用于检测猪瘟病毒。
①免疫荧光鉴定
1.ST细胞铺96孔板一个,同时接毒,按照5%接毒,每孔接50ul。
2.48-120小时测定荧光。用0.01Mpbs洗三次后弃掉pbs,拍干。 3.加入冷乙醇(-20℃存放)固定20分钟,放入-20℃后弃掉上清,不拍板。
4.pbs洗三次,弃上清,不用拍板,吸干水分。
5.加入一抗,按照0.1 mg/ml加入。37℃防置40分钟,pbs洗三次,吸干水分。
6.加入二抗(按1:40加入,pbs稀释)37 ℃防置40分钟。Pbs洗4次,吸干水分,不拍板,观察。
7.显微镜亮度:1.5亮度
注意:1.做不接毒的空白细胞对照。
2.pbs洗要同一位点加入,要温柔。
3.铺板同步接毒。
②胶体金初步鉴定
18G4标记金,10A2 划线组合,测定病毒液1:5稀释,*。
所开发试纸条产品显示: 1,所开发试纸条产品用于检测各厂家猪瘟活疫苗中有效抗原的含量,可以将油佐剂疫苗冷冻破乳化,但不可以用乙醇和二甲基亚砜等使蛋白变性的有机溶剂破乳化。
2,所开发试纸条产品用于临床病料的猪猪瘟病毒诊断,可用于扁桃体或者猪肾、脾等组织用于检测猪瘟病毒。
配对情况:10A2-18G4 ,推荐10A2划线,18G4标记金。
推荐使用浓度: 胶体金: 5微克/ml金液,划线0.5-1mg/ml
ELISA: 1:50 000-50 0000
WB及免疫组化,免疫荧光:1:50-1:500
③ 特异性、符合率、稳定性、灵敏度、假阳性率、假阴性率
特异性: 本配对抗体开发的试纸条产品只识别猪瘟病毒,与其他病毒无交叉反应。
符合率:本试纸条与PCR符合率99%。
稳定性: 本试纸条常温的保质期为36个月。
灵敏度: 不低于PCR的灵敏度。
假阳性率: <5%
假阴性率: 0%
四、配套羊抗鼠二抗与万能C线反应蛋白; CSFV纯化标准阳性 抗原。
五、产品说明书附录
生产公司:山东绿都生物科技有限公司
地址:山东省滨州市黄河二路169 绿都生物高科技园