康宁Corning NK细胞活化扩增培养基套装

康宁Corning NK细胞活化扩增培养基套装提供了NK 细胞活化扩增的全套材料和标准操作方法，所得NK细胞扩增能力强，活性和杀伤能力高。研究者无需优化，而且使用步骤精简。和竞争产品比较了NK细胞产量，活力和NK 细胞体外 阳性表达比率和杀伤能力。

产品订购信息

品牌          货号        产品描述                         包装

Corning    88-570-kit      NK细胞活化/扩增培养基套装       1kit

康宁Corning NK细胞活化扩增培养基套装组成

1. NK细胞活化培养基

2. NK细胞活化添加剂

3. NK细胞扩增培养基

4. 抗体预包被T75细胞培养瓶

5. 细胞培养袋

康宁Corning NK细胞活化扩增培养基套装特色

1. 扩增能力强，在14天内可达到100倍扩增

2. 效应细胞比例高，可达80％

3. 操作方便

自然杀伤（NK）细胞是可识别和杀死肿瘤和病毒感染的关键免疫细胞。 NK细胞是当今免疫-治疗常用的细胞。但是NK细胞培养操作难度大，对培养条件、培养技术要求很高，难以获得高纯度高效能的活性细胞。过度免疫-治疗所必需的离体NK细胞很难获得。 已经报道了几种NK激活/扩增方法，其使用扩增介质加各种细胞因子（例如IL-2，IL-7和IL-15）。 然而，这些需要研究人员的进一步优化。

Corning NK细胞活化扩增培养基套装NK细胞体外扩增试剂盒包含预先涂覆的T-75烧瓶，50mL NK原代培养基，1.8mL NK Primary补充剂和1L NK扩增培养基。 NK细胞体外扩增试剂盒前三个组分是专为NK细胞激活设计的，而NK扩增培养基用于NK细胞的扩增。 NK初级培养基和NK膨胀培养基都使用高品质试剂和cGMP级原料制造。 NK细胞体外扩增试剂盒存在于培养基中的weiyi蛋白质是血清白蛋白和重组人胰岛-素的可注射水平。

Corning NK细胞活化/扩增培养基套装由多个组分组成，为NK细胞培养提供简便的操作方案。使用Corning NK细胞活化扩增培养基套装所获得细胞数量产量高，活性高，具有很高的杀伤效应。

关于使用该试剂盒激活和扩增的细胞的增殖率，免疫表型和CCK-8细胞毒性测试的信息，请参阅Corning应用笔记使用康宁NK扩增试剂盒（CLS-CG-AN-427）进行人类天然杀伤细胞扩增。

NK 细胞活化扩增培养基套装操作方法

1.  抗凝血室温离心，400 xg，10min，上层血浆转移到新管。

2.  热灭活自体血浆，56°C，30min。离心， 800 xg ， 20 min，去除沉淀。4°C 保存上清血浆，培养备用。

3.  加入等体积PBS（不含钙镁）替代被移除血浆保持体积不变，小心重悬血细胞。

注意：PBS预加0.1%人血清白蛋白（HSA）利于保持血细胞活性。

4.  使用淋巴细胞分离液从上面的血样中制备PBMCs（人外周血单个核细胞）。

注意：使用新鲜采集的人血（2h内采集）有利培养，不要使用超过24h的血样。

5.  至少5倍体积的PBS（不含钙镁）清洗PBMCs。室温离心500xg，10min，收集PBMCs。

6.  PBMCs稀释到 1 x 106 cells/mL，使用NK活化培养基配比1.8mL NK活化添加剂和10%自体血浆。

7.  预包被T-75培养瓶使用前，用PBS（不含钙镁）清洗两次。

8.  添加30 mL PBMC悬液到预包被T-75培养瓶，37°C，5% CO2培养。

注意：第六天之前，如果培养基变黄，细胞密度超过2.0 x 106 cells/mL，需要添加新鲜的NK活化培养基配比10%自体血浆，保持细胞密度大于 5 x 105 cells/mL。

9.  培养第六天，培养液离心，适量NK扩增培养基（1000 IU/mL IL-2 和10%自体血浆）重悬细胞，再转移到T-225培养瓶或透气细胞培养袋。

10.  每隔两三天，根据细胞扩增状态，培养体系中添加新鲜的NK扩增培养基（1000 IU/mL IL-2 和10%自体血浆）保持细胞密度在5 x 105到 2.0 x 106 cells/mL之间。

注意：NK扩增阶段，所加新鲜培养基自体血浆含量推荐范围：0.5%-1%。

11.  培养14天左右，收获NK细胞。

注意：整个实验过程中，细胞悬液吹打和培养容器拍打都要轻柔，以避免细胞损伤，保持细胞活性。

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