人乳腺癌细胞MDA-MB-231介绍

　　该细胞系由CailleauR在1976年从一名48岁的患有转移性乳腺癌的白人女性的心包渗出液中分离建立的。该细胞表达FGF的受体。

　　细胞特性

　　（1）来源：乳腺癌

　　（2）形态：上皮细胞样，贴壁生长

　　（3）含量：>1x106个/mL

　　（4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

　　（5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

　　人乳腺癌细胞MDA-MB-231运输和保存

　　可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

　　（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；

　　（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

　　（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

　　MDA-MB-453人乳腺癌细胞/STR鉴定用途：仅供科研使用。

　　细胞接受后的处理：

　　（1）收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

　　（2）在显微镜下确认细胞生长状态时，在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给细胞拍照各2-3张（10×，20×都要拍照），作为售后的依据。

　　（3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

　　（4）贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。

　　（5）悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基）。

　　（6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。收到细胞后di一次传代建议1：2传代。

　　细胞培养步骤

　　一．培养基及培养冻存条件准备：

　　（1）准备L15（推荐iCell-0009）培养基；优质胎牛血清，10%；双抗，1%。

　　（2）培养条件：气相：空气，100%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

　　（3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

　　二．细胞处理：

　　（1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

　　（2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

　　1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

　　3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

　　注：di一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

　　（3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

　　下面T25瓶为类；

　　1、细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

　　2、4min1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

　　3、将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

　　镜像绮点（上海）细胞技术有限公司主要产品和服务介绍：

　　一、原代细胞服务：

　　各类模式哺乳动物的多种原代细胞资源

　　多种人源性正常及肿瘤原代细胞资源

　　原代细胞分离和培养相关试剂、kit、培养基添加剂等

　　原代细胞相关技术服务及整体实验外包服务

　　二、细胞系服务：

　　细胞株/系培养、增殖、冻存和相关说明书

　　细胞系培养过程的技术指导

　　细胞系培养基、添加剂、血清及相关生长因子、试剂等

　　三、iPS细胞服务：

　　iPS细胞基础培养（有滋养层or无滋养层）

　　iPS细胞增殖及冷冻保存

　　iPS基础培养技术实习

　　新药及实验仪器上市前评估

　　四、其他技术外包服务、客户定制服务等

　　镜像绮点（上海）细胞技术有限公司