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色谱柱污染色谱柱污染会引起保留时间漂移。HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器,它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。污染源可能是:流动相本身,流动相容器,连接管,泵,进样器和仪器密封垫,以及样品等。
样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分,就可能使保留时间漂移。通常样品中的强保留组分具有较高的分子量,在此情况下,保留时间漂移的同时或其后会有反压的增加。可以通过使用固相提取等样品前处理方法来去除样品基质的影响。
避免色谱柱污染简单的方法是防患于未然。相比之下,找到问题的所在并设计有效的清洗步骤以去除污染物要困难的多。通常使用在给定色谱条件下的强溶剂,但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。使用保护柱是个非常有效的方法。反冲色谱柱仅是不得已时采用的办法。
4色谱柱平衡如果我们观察到保留时间漂移,首先应考虑色谱柱是否已用流动相*平衡。通常平衡需要10~20个柱体积的流动相。但如果在流动相中加入少量添加剂则需要相当长的时间来平衡色谱柱。需要柱子的充分平衡,然后才能对HPLC进行检定。
5流动相有机溶剂HPLC分析总要求使用HPLC纯的试剂,关键是两点:纯度高,紫外吸收小。纯度高,是希望没有杂质干扰HPLC分析,不会有金属离子损害纯度为99.99%以上的高纯度硅胶基质。可以通过重蒸分析纯溶剂,或滤膜过滤,并定期把前置的过滤头取下,放稀里清洗,再用纯水洗至中性。
流动相有机溶剂可能影响HPLC的检测限。6柱压柱压过高是HPLC分析中常碰到的问题。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题。溶剂或样品含有颗粒杂质,这些杂质将筛板堵塞引起压力上升,应更换柱子入口筛板,泵内有空气,解决的办法是泵内空气,对溶剂进行脱气处理,比例阀失效,应更换比例阀,泵密封垫损坏,应更换密封垫,系统检漏,则找出漏点,密封即可。
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