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Tunel检测病理实验技术服务
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上海创凌生物科技有限公司位于上海杨浦科技园区，由生物领域专业人士创办，是一家集研发、销售、实验技术服务于一体的高科技企业。创凌坚持自己的经营理念，始终致力面向生命科学领域，从事生物医学技术服务的学术辅助/科研外包，科研机构及生产企业所需的各类生产原料、试剂、仪器、耗材等的业务。勤奋踏实地整合产品资源与技术资源，为高校、科研院所的科研工作者以及生物制品生产企业提供一站式产品服务方案，帮助科研及企业单位缩短科研时间、节约科研成本、提升科研水平、增强企业市场竞争力。
自成立以来发展迅速，产品服务得到全国广大生产企业、高校、科研院所、医疗系统及相关试剂公司的肯定，长期合作的客户遍及全国各地。为更好地服务广大用户，不断降低生产成本并向我们的客户提供更强大的产品服务。创凌竭尽所能，与广大生命科学工作者携手迎接属于生命科学的21世纪，共同创造新世纪的生物技术革命。
详细信息
Tunel检测病理实验技术服务原理
晚期凋亡细胞中染色体DNA双链或单链断裂产生粘性3'-OH末端，在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的催化下，将带有荧光素分子的dUTP标记到DNA的3'-末端，然后通过荧光显微镜观察、或进而用带有HRP的一抗染色后DAB显色，可以进行凋亡细胞的检测，该实验称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。
Tunel检测可以标记组织细胞中发生凋亡的细胞，通过核复染计数细胞比例，可以计算一定组织细胞中发生凋亡的细胞比例，常用在各方向生物学研究中凋亡发生的检测以及定性比较。
实验流程
石蜡切片/冰冻切片/细胞爬片-脱蜡-通透-酶标记反应-HRP抗体,DAB显色，可白光拍照-核复染-观察拍照。
实验方法
对于贴壁细胞或细胞涂片
a. PBS或HBSS洗涤一次。
b. 如果细胞贴得不牢，可以干燥样品使细胞贴得更牢。
c. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。
d. 用PBS或HBSS洗涤一次。
e. 加入含0.1% Triton X-100的PBS，冰浴孵育2分钟。
f. 转步骤5。
对于悬浮细胞或细胞悬液
a. 收集细胞(不超过200万细胞)，PBS或HBSS洗涤一次。
b. 用4%多聚甲醛固定细胞30-60分钟。为防止细胞聚集成团，宜在侧摆摇床或水
平摇床上缓慢摇动的同时进行固定。
c. 用PBS或HBSS洗涤一次。
d. 用含0.1% Triton X-100的PBS重悬细胞，冰浴孵育2分钟。
e. 转步骤5。
对于石蜡切片
a. 二甲苯中脱蜡5-10分钟。换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟。无水乙醇5分钟。90%乙醇2分钟。70%乙醇2分钟，蒸馏水2分钟。
b.滴加20μg/ml不含DNase的蛋白酶K，20-37℃作用15-30分钟(不同组织的作用温度和时间需自行摸索)。
c. PBS或HBSS洗涤3次。注意：这一步必须把蛋白酶K洗涤干净，否则会严重干扰后续的标记反应。
d. 转步骤5。
对于冷冻切片
a. 用4%多聚甲醛固定细胞30-60分钟。
b. PBS或HBSS洗涤2次，每次10分钟。
c. 加入含0.1% Triton X-100的PBS，冰浴孵育2分钟。
d. 转步骤5。
对于贴壁细胞、细胞涂片或组织切片
a. 用PBS或HBSS洗涤2次。
b. 在样品上加50μl TUNEL检测液，37℃避光孵育60分钟。注意：孵育时需注意在周围用浸足水的纸或药棉等保持湿润，以尽量减少TUNEL检测液的蒸发。
c. PBS或HBSS洗涤3次。
d. 用抗荧光淬灭封片液封片后荧光显微镜下观察。可以使用的激发波长范围为450-500nm，发射波长范围为515-565nm(绿色荧光)。
对于悬浮细胞或细胞悬液
a. 用PBS或HBSS洗涤2次。
b. 加入50μl TUNEL检测液，37℃避光孵育60分钟。
c. PBS或HBSS洗涤2次。
d. 用250-500μl PBS或HBSS悬浮。
e. 此时可以用流式细胞仪进行检测或涂片后在荧光显微镜下观察。可以使用的激发波长范围为450-500nm，发射波长范
围为515-565nm(绿色荧光)。
Tunel检测病理实验技术服务样本保存运输
| 实验项目 | 标本要求 | 标本保存运输条件 | 可能存在风险 | 建议 |
| Tunel检测 | 按制作石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片要求送样 | 石蜡切片常温、冰冻切片-20℃、固定后细胞爬片 | 染色结果同造模效果密切相关，正常组织可能阳性率很低 | 以实际结果为准 |
