结晶紫酶联免疫反应测试盒

结晶紫ELISA试剂盒特点 ：

高回收率（80-95%)，快速地从鱼虾或者水样中提取结晶紫试剂盒也可以检测隐性结晶紫，检测前先用提供的氧化液将隐性结晶紫转变成有色结晶紫。96孔高通量定量检测，鱼或者虾样品的检测下限为)0. 1PPB制备好的样品，可以直接用于LC或者LC/MS确认，高重复性结晶紫酶联免疫反应检测试剂盒是利用竞争性的酶联反应原理定量检测分析结晶紫在鱼、虾以及鱼池或者鱼缸水样中的含量。

结晶紫ELISA试剂盒原理：

实验方法基于竞争性酶联反应原理。徹孔板上包被有 cv的特异性抗体。测试分析时.样品和 CV- HRP耦合物共同孵育。如果样品中含有CV抗原，就会竞争抗体，从而陌止CV-HRP耦合物与抗体结合。加入HRF耦合物的底物在加入底物后将催化底物 显 色 . 根 据 颜 色 反 应 的 灵 敏 度 来 确 定 样 品 中C V的 浓 度 。 颜 色的深浅同样品中药物的浓度成反比矢系。

注意事项：

i>标准品中含有结晶紫，请小心使用。

2>不要使用过期的试剂盒。

3)不同批次的试剂盒不要混用，抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。确保二抗及二抗稀释液正确配制。

4>尽 M保持室温20-25 V,避免在通风口操作防止温度过低，过热和/或者蒸发。同样的，不要在阳光直射下实验，防止过热及蒸发a在 孵 W 期间，如果工作台温度过低，应该铺垫若干纸巾或者其他物料。

5>水质量很里要，确保使 m蒸馏或者去离子水。

6>加入样品或者试剂到空的微孔板时，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接触。

7>孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性，先添加标准品后添加样品。

8>从低浓度到高浓度地添加标准品，降低影响标准品曲线质的风险。

9>将微孔板置于放有千燥剂的密封袋中，冷藏保存。

试剂盒组成：

已包被抗体的酶标板 （CRYSTAL VIOLET AB-COATED

PLATE)( 可拆式）

12x8 孑 L

标准液（ STANDARDS) (0 , 0.OS , 0.15 , O.S , 1.S , 4.S

NG/M L ) 6 x 1 .8 M L

回收用 100PPB (SPI Kl NG)( 可选）

1 x 〇 . 8 M L

CV-HRP 耦合物（ CV-HRP CONJUGATE)

1 x 8 M L

2 〇 x 浓缩洗液 （WASH SOLUTION)

1 x 28 M L

终止液 （STOP BUFFER)

1 x 20 M L

TMB 底 物 （TMB SUBSTRATE)

1 x 1 2 M L

提取物 A(CONCENTRATE OF SAMPLE EXTRACTION

BUFFER A)( 包括试剂 I 和 M) 20G

1 〇 x 提取液 B (SAMPLE EXTRACTION B)

检测步骤

(1 )加入1 00 L的标准品或样品于所设定的孔中；

(2 )在每孔中加入50 L CV- HRP耦合物，轻敲微孔板边缘混匀1分钟；

(3 )避光室温（20 - 25 °C )温育1小时；

(4 )洗板3次，每次加入250 L 1 x洗液，后_次尽量甩干并在吸水纸上吸干；

(5 )加入100 L的 TMB底物；

(6 )在室温下避光培养20分钟，加入100 L的终止液终止反应，在450 NM下读0 D值（底物本身是无色的，颜色发生变化不能使用。孵育时适当覆盖微孔板）。

试剂的准备

确定样品正确储存.通常，样品应该在2-4° C下冷藏不得超过1 - 2天.如果需要长时间保存冷冻样品低温度-20 X.冻结的样品在室温（20-2 SaC / 68-77 ttF)下解冻或者在使用之前放在冰箱中保存。所有的试剂在使用之前应将其回温至室温，并在使用试剂前摇动几下，以保证合理的浓度^

(1 ) 1倍氧化剂液

根据实际上需要，按9: 1用乙腈稀释10 x氧化剂液（1〇 X OXIDANT SOLUTION)。

(2 ) 1倍提取液A

打幵提取液A固体浓缩袋（EXTRACTION BUFFER A CONCENTRATE ),取出试剂 I和丨丨，混和加入一容 fi瓶中•加入100 ML双蒸水，搅拌至*溶解，可在室温(2 0-2 S °C / 68-7 7*^)下*保存。（试剂具有腐蚀性，混合搅拌时候带手套操作）

(3 ) 1倍提取液B

根据实际上需要，按9:1用蒸馏水稀释1〇 X 提取液B。

(4 ) 1倍提取液C液

根据实际上需要，按9:1用蒸馏水稀释1〇 X 提取液C

(1) 分别计箅标准和样品的平均吸光度值和相对吸光度值相对吸光度值（％) = (标准或样品吸光度值/零标准吸光度值）*100

(2) 以相对吸光度值为纵坐标，标准浓度为横坐标建立标准曲线

(3) 从标准曲线上读取样品的浓度值备注：如结果呈阳性反应，应该用其他检验方法（如色谱/质谱方法等）进行确证。