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大肠杆菌蛋白表达系统
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安诺伦（北京）生物科技有限公司是一家创办于2015年的创新型高科技企业，公司由在国内科研试剂领域有着十几年从业经验的专业技术团队和企业管理团队组建而成，专门从事以抗体、蛋白、细胞、化学品为核心的试剂产品研发与销售。
自公司成立以来一直以“客户至上”为公司核心价值观，专注于为生命科学和生物技术领域的客户提供优质的产品和技术服务。本着始终拥有的服务热忱，安诺伦生物致力于成长为我国重要的生命科学试剂和成果转化一体化的前驱者、致力于成为中国大的科研试剂产品供应商之一。
Annoron——是安诺伦生物集科研试剂搜索、采购一体化网站平台，公司通过建立覆盖欧美的*，与欧美100多个品牌建立了正式的代理与合作，基本涵盖所有的生物试剂门类，特别是二三线高质量品牌产品，优势更大！
我们的优势：
1，覆盖欧美的*，总部设立在美国加州，采购团队有10多人，能进口涵盖抗体，蛋白，细胞，血清，耗材等的全门类生物产品。
2，货品多且全，目前，以我们美国公司为主体，与欧美100多个品牌建立了正式的代理与合作，基本涵盖所有的生物试剂门类，特别是二三线高质量品牌产品，优势更大！
3，现货库存，我们已经在北京和武汉建立了自营库存，并将逐步建立上海库存、成都库存、广州库存，目前涵盖100个门类，将近10000个现货产品！
4，期货提供加急服务，一般2-3周到货，超过时限加急费全免！
5，价格优势，依托我们一体化的整合优势，我们致力于提供竞争力的价格！
6，优质的信誉，我们的客户群包括*，清华大学，北京大学，复旦大学，南京大学等100多所大学；康龙化成，昭衍新药，美迪西，保诺生物，正大天晴等500多家公司！
我们的产品——
抗体类
• 一抗／二抗产品
• 标记一抗／二抗相关产品
• Elisa试剂盒，配对抗体
• 多种试剂盒，PCR试剂盒，DNA提取试剂盒，RT实时定量试剂盒
蛋白类
• 重组蛋白／天然构象蛋白
• 小分子抗原，细胞因子
• 多肽类
分子细胞类
• 肿瘤细胞／传代细胞／原代细胞
• 定制化的耐药细胞
• 高品质血清
• 常用培养基，分子细胞实验试剂
• 合成引物／载体／质粒
化学品与试剂
• 化学中间体
• 化学合成常用试剂
• 定制中间体合成
• 对照品／标准品
• 液相／气相色谱实验佐剂
欢迎您来电垂询，我们竭诚为您服务！
此致敬礼！
| 抗体： | 一抗，二抗，标记抗体，流式抗体，抗体血清 |
| 试剂盒： | Elisa试剂盒，PCR试剂盒，基因敲除试剂盒，Real-Time实时定量试剂盒,STR试剂盒 |
| 蛋白与多肽： | 重组蛋白，天然蛋白，多种肽段，多种属蛋白和抗原（动植物，细菌，病毒等） |
| 细胞产品： | 各种细胞株，种属多元化，细胞类型多样，肿瘤细胞，干细胞，星状细胞，传代细胞，原代细胞等 |
| 酶类： | 内切酶，蛋白酶，核酸酶，聚合酶 |
| 克隆/载体： | PCR克隆载体，细菌/病毒克隆载体，多种属的表达载体 |
| 血清/培养基： | 细胞实验常规培养基，澳洲胎牛血清，北美牛血清，高质量细胞实验相关试剂 |
| 常用试剂： | 对照品以及标准品，免疫组化常用试剂，免疫印迹常用试剂，常用显色试剂，细胞生物学试剂，气相色谱试剂，液相色谱试剂等 |
| 化学品： | 产品（提供结构或者CAS化学试剂，中间体，订制化学） |
| 引物/探针： | 依据序列三天支付结果 |
| 脂质体： | 常规产品常年现货 |
详细信息
大肠杆菌表达系统简介
1. 代谢途径和基因表达调控机制比较清楚
1) 全基因组测序，共有4405个开放性阅读框架；
2) 基因克隆表达系统成熟完善；
3) 繁殖迅速，培养简单，操作方便，遗传稳定。
2. 培养周期短
1) 大肠杆菌繁殖能力强，在营养条件充足时，20~30mins即可繁殖一代；
2) 大规模发酵成本低，具有巨大的生存潜力。
3. 目标基因表达水平高
表达水平较一般真核表达系统高，某些外源基因在大肠杆菌中的表达量可达总蛋白的5%~30%。
4. 遗传背景清楚
1) 对大肠杆菌的遗传背景和生理特性研究相当清楚，已有多种不同的抗药性、不同营养缺陷型和不同校正突变型的菌株供选择使用；
2) 可以根据不同的载体而选择不同的菌株。
5. 抗污染能力强，下游工艺简单，易于控制。
6. 已有大量可供选择利用的表达载体，被美国FDA批准为安全的基因工程受体菌。
艾柏森生物大肠杆菌表达系统优势
1. 艾柏森生物大肠杆菌可溶性表达成功率高达95%；
2. 艾柏森生物可以提供多种大肠杆菌表达载体，pET28b、pET22b、pGEX-6P-1等。
3. 多种大肠杆菌表达宿主，标准表达菌株BL21，可增强表达蛋白的菌株T7E，表达毒性蛋白的C41，增强蛋白可溶性表达的超低温菌株Arctic，以及其他经过艾柏森生物分子技术团队改造过的表达菌株，可以满足客户的不同需求。
4. 表达系统的优化。通过对表达系统进行优化，很大程度上解决蛋白不表达和包涵体的问题，如表达载体与表达菌株相容性测试、诱导表达条件的优化、复性等。
服务组合
| 服务项目 (Service Items) | 周期（周） Time(weeks) |
| 蛋白分析与密码子优化 | 项目开始前完成 |
| 基因合成 | 2~4 |
| 载体构建 | 1 |
| 基因表达纯化测试 | 2 |
| 1L发酵表达及纯化 | 2 |
| 切标签 | 2 |
| 大规模的发酵与纯化 | 以项目需要为准 |
| 总计 | 8~10 |
注：
1）表达纯化测试一般包括2种载体，3种表达菌株，2个表达温度，12个条件的测试，根据客户的前期实验结果，有可能调整或缩短试验周期；
2）我们可提供的备选优化条件如下：
| 表达载体 | pET28b\\pET32a\\pGEX-6p-1\\pET22b\\pBAD\\pTrcHis等 |
| 表达菌株 | Arctic\\BL21(DE3)\\Origami\\Rosetta\\T7 Expresss |
| 表达温度 | 16℃\\30℃\\37℃ |
经典案例
以某原核蛋白为例:
1. 优化表达体系，包括苏朱军、诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度及培养基。
| 宿主菌 | 诱导温度 | 诱导时间 | 诱导剂 | 培养基 |
| T7E，BL21,C41,Arctic | 30℃/37℃ | 1h/4h | IPTG自诱导 | LB/定制/同位素/自诱导 |
经过3轮优化，我们选择了BL21+pGEX-6p-1组合，并发现温度对与目标蛋白的表达影响大，如图一
图一:融合蛋白小试SDS-PAGE分析图
M:ProteinMarker；：诱导前总蛋白；
2：20℃上清；3：20℃沉淀；4：37℃上清；5：37℃沉淀。
2. 在确定了表达条件后，我们对蛋白进行了GST琼脂糖亲和层析尝试纯化，如图二，
图二：GST琼脂糖亲和层析纯化SDS-PAGE分析图
M：Protein marker；S：上样；F：流出；1：20mM GSH洗脱组分；
3. 在确定纯化效率可以接受的条件下，我们对蛋白进行了大体积发酵，并终纯化SDS-PAGE分析，如图三，融合蛋白经过纯化，SDS-PAGE电泳分析在相应位置出现明显条带，表明目的蛋白成功得到了纯化。
图三：蛋白终纯化SDS-PAGE分析图
M：Protein marker；1：目的蛋白
4. 蛋白浓度测定
采用SK3071 非干扰型蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度为1.06mg/mL，待测样品体积为10μL，结果如下：
| 测试1 | 测试2 | 平均值 | BSA（μg） |
| 0.939 | 0.939 | 0.939 | 0 |
| 0.875 | 0.874 | 0.8745 | 8 |
| 0.808 | 0.804 | 0.806 | 16 |
| 0.74 | 0.746 | 0.743 | 24 |
| 0.618 | 0.616 | 0.617 | 40 |
| 0.855 | 0.849 | 0.852 | 50 |
| 0.891 | 0.878 | 0.8845 | 目的蛋白 |
图四：蛋白浓度测定
