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A004-96T 羟基自由基清除能力测试试剂盒上海惠诚现货
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- A004-96T
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上海惠诚生物科技有限公司，成立于2010年，企业宗旨“惠质产品，挚诚服务”。惠诚生物自成立以来，一直致力于为客户提供一站式科学服务，产品覆盖设计开发全过程，提供实验室设计、实验室建设、仪器设备、耗材、试剂、技术服务等专项配套服务。上海惠诚生物按照客户的研发、生产和质量控制环节整合各种优质资源，优化资源组合，为客户提供整体解决方案。
上海惠诚生物在上海建立研发中心，在湖北和江苏有生产基地，在广州和深圳建立子公司，立足上海，销售网络遍布全国，为客户提供综合服务。
“不忘初心，砥砺前行”。 上海惠诚生物经过多年不懈努力，目前产品线包括：生命科学，分析化学，生化试剂和仪器耗材。客户遍布：生物医药，体外诊断，食品行业，石油化工，科研院校和研究所等领域。
特色产品：
生命科学：Crispr系列产品，组织因子，电泳预制胶，荧光染料，核酸探针，大包装新冠抗原抗体，工业用酶
分析化学：糖化学研究，脂类分析，植物分析，聚合物分析，医药分析，试剂盒
生化试剂：PEG衍生物，多肽，大包装胶体金辅料，大包装生物医药辅料，通用生化试剂
仪器耗材：生物上游工艺，生物下游工艺，细胞治疗，微生物监测，理化分析，公用系统。
品牌服务：
生命科学：
Abcam、AdooQ、ALPCO、Biolegend、Cytiva、Cayman、Dojindo、Immunostar、Invitrogen、Jackson、美天旎Miltenyi、Novoprotein近岸、Prozyme、R&D、SinoBiological义翘、Stratagene、SYSY、Thermo Fisher、Wako、Topoen
分析化学：
AOCS、Carotenature、CIL、DR、Elicityl、EP、Glycarbo、Larodan、Matreya、Megazyme、Nu-Chek、Olchemim、Phytolab、QCC、Reagecon、TLC、TRC、USP
生化试剂：
Aladdin阿拉丁、Avanti、Broadpharm、Focus、Laysan、LKT、Macklin麦克林、Sigma、TCI、Thermo Fisher、vivitide
仪器耗材：
湘仪、精骐、Corning、Eppordorf、浙江孚夏、力康、海尔、汇松、赫西、Mettler Toledo、Millipore、NEST、松下、Pall、Rainin瑞宁、Whatman、上海一恒
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详细信息
羟基自由基清除能力测试试剂盒上海惠诚现货供应
（A004-96T）
一、 测定原理
金属离子与过氧化氢通过芬顿反应生成的羟基自由基（•OH），•OH攻击脱氧核糖并破坏其环呋喃环生成丙二醛（MDA）。丙二醛与2-硫代巴比(空格)妥酸（TBA）结合后在532nm处具有大吸收峰（Halliwell等，1987，ANAL BIOCHEM）。具体反应如下：
Fe3+-EDTA + 抗坏血酸 → Fe2+-EDTA +氧化的抗坏血酸 (1)
Fe2+-EDTA + H2O2 → OH- + •OH + Fe3+-EDTA (2)
•OH + 脱氧核糖 → 脱氧核糖碎片 MDA (3)
MDA + 2TBA → 发色体(4)
专一的羟基自由基抗氧化剂能减少羟基对脱氧核糖的攻击，从而减少MDA产生而使发色体减少。通过测定反应终产物的吸光值即可判断受测样品的羟基自由基清除能力。
二、 试剂组成
试剂一：液体，2mL；
试剂二：液体，2mL；
试剂三：液体，2mL；
试剂四：液体，2mL；
试剂五A：液体，100mL；
试剂五B：淡黄色粉末；
试剂六：液体，100mL；
标准品：体系终浓度为10mM的甘露(空格)醇（双蒸水配制），10mL。
三、 储存条件及有效期
试剂盒-20℃可保存6个月。
四、 试剂的配制
试剂一应用液：待试剂融化后，在试剂一瓶中加入18mL双蒸水，摇匀待用；
试剂二应用液：待试剂融化后，在试剂二瓶中加入18mL双蒸水，摇匀待用；
试剂三应用液：待试剂融化后，在试剂三瓶中加入18mL双蒸水，摇匀待用；
试剂四应用液：待试剂融化后，在试剂四瓶中加入18mL双蒸水，摇匀待用；
试剂五应用液：待试剂五A融化后，将试剂五B全部倒入试剂五A中，充分摇匀溶解（若发现不好溶解，可超声波助溶或适当加热。如不易观察是否全部溶解，可将试剂五A倒入烧杯中，配制好后再倒回试剂五A瓶内，避光保存）；
试剂六：直接使用；
标准液：根据实际需要，采用双蒸水稀释使用。
所有试剂均需现配现用！
五、 操作步骤
样品对照孔1 | 样品测定孔 | 空白孔 | |
样品溶液（μL） | 200 | 200 | |
双蒸水（μL） | 200 | 200 | |
试剂一应用液（μL） | 200 | 200 | |
试剂二应用液（μL） | 200 | 200 | 200 |
试剂三应用液（μL） | 200 | 200 | 200 |
试剂四应用液（μL） | 200 | 200 | 200 |
充分混匀，37℃水浴30min使之充分反应。
样品对照孔 | 样品测定孔 | 空白孔 | |
试剂六（μL） | 1000 | 1000 | 1000 |
试剂五应用液（μL） | 1000 | 1000 | 1000 |
充分混匀，100℃沸水浴15min2。
冷却后进行比色读数。如您具有可以测定532nm处吸光值的酶标仪，可从反应液中取出200μL于酶标板内采用酶标仪读数；或者您也可以采用分光光度计测定532nm处吸光值。
1如样品颜色较浅可不做样品空白（即认为值为0）；
2建议反应15min，也可适当延长或缩短时间至10-20min，但同一批样品加热时间需保持一致。
六、计算公式
注： 如未做对照孔，可以将其视作为0；
七、注意事项
1. 如样品中色素物质不是分析对象，建议先进行脱色处理，处理后样品可不做对照孔；
2. 如不确定样品的羟基自由基清除能力，可先做不同浓度的稀释液进行摸索，并选择适宜浓度进行测定，高浓度下，浓度与清除率间并不线性相关。注意，产物的不同自由基清除能力可能相差很大，可能一个化合物的超氧阴离子自由基清除能力特别好，IC50可以低于10μg/mL，但羟基自由基清除能力很差，IC50达到10mg/mL，或者根本没有清除能力；
3. 混匀很重要，建议每加一种试剂时均充分混匀。
4. 100℃沸水浴可采用水浴锅或者电磁炉进行加热。加热时可用锡纸盖住试管管口，并用牙签戳一个小孔。若使用一次性离心管进行实验，切记不可将上盖盖死，气体膨胀有爆裂危险！
5. 加样顺序不可颠倒！不可将试剂一至四混匀后加入样品；
6. 本测试盒部分试剂对皮肤有一定伤害，请戴手套操作。在沸水浴时小心蒸汽烫伤；
7. 煮沸加热时间和温度对本测试至关重要，请务必保证所有测试管加热时间和温度均相同。同时请务必等待样品冷却到室温时再进行读数测定，如需快速冷却，可采用自来水冲洗试管外壁的方法；
8. 测定羟基自由基的方法总类繁多（Halliwell等，1988，Methods of Biochemical Analysis），同一样品采用不同方法测定时会有一定差异，因此不同方法测定的结果不能简单比较；
9. 本测试样品一般不可采用有机溶剂溶解！极少量也不可以！常见的有机溶剂如乙醇等，其通过本方法得到的羟基自由基清除率*，超过许多常见抗氧化剂，不可以忽略。不可使用的有机溶剂及机理参见文献：Xican Li, 2013, Food Chemistry.
羟基自由基清除能力测试试剂盒上海惠诚现货供应
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