ZETA LIFE细胞增殖及毒性检测-CCK试剂盒

价格：￥615 - 2800

品牌：ZETA LIFE .

货号：K009

产地：USA

供应商:上海徕仪生物科技有限公司

数量:1000

英文名:cck8

保质期:24 months

保存条件:4°C避光保存

规格:500T-3000T

 ZETA LIFE细胞增殖及毒性检测-CCK试剂盒

CellCounting Kit简称CCK试剂盒，是一种基于WST (水溶性四唑盐，化学名: 2- (2-甲氧基-4-硝苯基) -3- (4-硝苯基) -5-(2,4-二磺基苯) -2H四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

CCK是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其他MTT类似产品如XTT. MTS等相比有明显的优点:

-CCK被线粒体内的脱氢酶还原成的formazan是水溶性,不需要有特定的溶解液来溶解，而WST和XTT、MTS产生的formazan都不是水溶性的，因而可以省去后续溶解步骤。

-CCK比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。

-CCK和MTT、XTT等相比线性范围更宽，灵敏度更高。

CCK法与其他检测方法之间的比较：

操作说明:

一、制作标准曲线(测定细胞具体数 量时)

1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

2、按比例(例如: 1/2比例)依次用培养基等比稀释成-一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度， 每组3-6个复孔。

3、接种后培养2- 4小时使细胞贴壁,然后加CCK试剂培养-定时间后测定OD值， 制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),

OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要一

致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间)。

二、 细胞活性检测

1、在96孔板中接种细胞悬液(100ul孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在379C, 5% CO2的条件下)。

2、向每孔加入110ul的CCK 溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。

3、将培养板在培养箱内孵育14小时。

4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10ul 0. 1M的HCL溶液或者1% wIv SDS溶液,并遮盖培养

板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

三、细胞增值~毒性检测

1、在96孔板中配置100u的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在379C，5% CO2的条件下)。

2、向培养板加入10ul不同浓度的待测物质。

3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如: 6、 12、24或48小时)。

4、想每孔加入10ul CCK溶液(注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数)。

5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

7、如果暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10ul 0. 1M的HCL溶液或者1% wIv SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基)，去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

备往:

①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。

②有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔减的差异。加入

CCK试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气泡，会干扰OD值读数。

③白细胞可能需要培养较长时间。

④当使用标准96孔板时，贴壁细胞的小接种量至少为1 ,000个/孔L(100u培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此

推荐接种量不低于2500个/F孔(100ul培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。

⑤如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450nm滤光片的检测灵敏度较高。

⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

动计算:

细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)]x100

A(加药):具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度

A(空白):具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度

A(0加药):具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力

保存条件:

49C避光保存，有效期一年。

温聲提示:不可用于临床治疗。