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起订量：
AZ00007 Universal SYBR Green qPCR Mix
- 型号
- AZ00007
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上海徕仪生物科技有限公司是一家专注于生物技术领域的企业，由数位生物领域资深专家创办。公司现有员工60余人，其中博士以上学历占比24.2%，硕士及以上学历占比53.1%。主营业务包括分子生物学、细胞生物学、化学试剂及实验仪器设备和相关耗材，并提供从基因设计、构建到检测的一站式技术服务。
公司凭借较强的技术力量和科学的管理，为各类服务的顺利开展提供有力支撑，目前已经建立起多个实验平台，包括细胞培养、克隆构建、病毒包装、组织分析、分子检测等，实验流程均严格按照SOP操作。
公司秉承「专业、进取、诚信、务实」的经营理念，严把产品质量关，服务跟踪，以客户的需求为主要目标，竭诚为高校、科研院所的科技工作者提供各类优质产品和服务，帮助客户及单位提高研发效率、提升科研水平和增强市场竞争力。
详细信息
储运条件
长期保存请于-20℃避光保存，Mix 融解后可在4℃避光条件下稳定存放一个月，尽量避免反复冻融。
产品组分
Universal SYBR Green qPCR Mix
产品简介
Universal SYBR Green qPCR Mix 是SYBR® Green I 嵌合染料法专用qPCR 试剂，为2× 预混液，包含除引物和DNA 样品以外的所有qPCR 组分，可减少操作步骤，缩短加样时间，降低污染几率。其核心组分是经抗体修饰的热启动Taq DNA 聚合酶，配合精心优化的Buffer 体系以及PCR 反应促进因子，使产品具有特异性强、扩增效率高等特点，有效抑制非特异性扩增，可对宽广浓度范围的模板进行准确定量，获得稳定可靠的qPCR 结果。预混液中含有通用校正染料，与绝大多数 qPCR 设备兼容，包括需要 ROX 校正的仪器，实验过程中一般不需要额外添加校正染料。
使用方法
1. 使用注意
① 因Mix 中预混有染料，其保存或反应体系配制过程应避免强光照射；
② 使用前上下颠倒轻轻混匀Mix，请勿涡旋振荡混匀，避免产生过多气泡;
③ Mix 中含有Universal 校正染料，适用于所有机型，无需额外添加染料。
2. 建议的qPCR 反应体系
a. 通常推荐的引物终浓度为0.2 μM，反应效果不佳时可在0.1~1 μM 范围内进行调整；
b. 推荐模板加样量为1~2 μl，如模板类型为未稀释cDNA 原液，模板添加量不应超过总反应体系的10%。不同种类DNA 模板中含有的靶基因拷贝数目不同，必要时可进行梯度稀释，以确定最佳的DNA 模板添加量。
3. qPCR 反应程序（可根据机型适当调整）Universal SYBR Green qPCR Mix
两步法
三步法
a. 根据引物的Tm 值进行退火& 延伸（退火）温度的设定；若扩增片段在200bp 以内，退火& 延伸（延伸）时间可以设置为15 sec；此外，退火& 延伸（延伸）时间的设置还需根据您使用的qPCR 仪所需要的最短数据采集时间自行调整；
b. 不同qPCR 仪的熔解曲线采集程序有差别，一般可使用仪器默认的熔解曲线采集程序。
4. 实验优化
若使用默认反应条件反应性能不佳时，则需要进行反应条件的优化，可以从引物浓度以及扩增程序两个方面进行：
① 引物浓度调整
当引物终浓度在0.1~1.0 μM 范围之间变化时，引物浓度越低，扩增特异性越高，但扩增效率会有所下降。
② 扩增程序优化
需提高扩增特异性，可使用两步法程序或提高退火温度；需提高扩增效率，可使用三步法程序或延长延伸时间。
5. 引物设计原则
① 扩增产物长度建议控制在80~200 bp；
② 引物长度为18~25 bp；
③ 正向引物和反向引物的Tm 值相差不超过1℃为佳，Tm 值控制在58~62℃为佳；
④ 引物的GC 含量控制在40%~60% 之间；
⑤ 引物A、G、C、T 整体分布尽量要均匀，避开T/C 或者A/G 的连续结构（特别是3' 端）；
⑥ 引物3' 端最后一个碱基最好为G 或者C；
⑦ 避开引物内部或者两条引物之间的互补序列；
⑧ 使用NCBI BLAST 功能检索确认引物的特异性。
美国Azaood公司成立于2004年，是一家开发和生产用于生命科学研究、诊断和生物技术应用的高质量纯化酶、蛋白质、核酸和细胞分离试剂盒、胎牛血清的lingdao者；Azood公司是通过了ISO9001认证的主要制造商，可以满足从研究到大规模批量生物加工和OEM应用与要求的公司。
