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AZ00007 Universal SYBR Green qPCR Mix
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生产厂家上海徕仪生物科技有限公司是一家专注于生物技术领域的企业,由数位生物领域资深专家创办。公司现有员工60余人,其中博士以上学历占比24.2%,硕士及以上学历占比53.1%。主营业务包括分子生物学、细胞生物学、化学试剂及实验仪器设备和相关耗材,并提供从基因设计、构建到检测的一站式技术服务。
公司凭借较强的技术力量和科学的管理,为各类服务的顺利开展提供有力支撑,目前已经建立起多个实验平台,包括细胞培养、克隆构建、病毒包装、组织分析、分子检测等,实验流程均严格按照SOP操作。
公司秉承「专业、进取、诚信、务实」的经营理念,严把产品质量关,服务跟踪,以客户的需求为主要目标,竭诚为高校、科研院所的科技工作者提供各类优质产品和服务,帮助客户及单位提高研发效率、提升科研水平和增强市场竞争力。
储运条件
长期保存请于-20℃避光保存,Mix 融解后可在4℃避光条件下稳定存放一个月,尽量避免反复冻融。
产品组分
Universal SYBR Green qPCR Mix
产品简介
Universal SYBR Green qPCR Mix 是SYBR® Green I 嵌合染料法专用qPCR 试剂,为2× 预混液,包含除引物和DNA 样品以外的所有qPCR 组分,可减少操作步骤,缩短加样时间,降低污染几率。其核心组分是经抗体修饰的热启动Taq DNA 聚合酶,配合精心优化的Buffer 体系以及PCR 反应促进因子,使产品具有特异性强、扩增效率高等特点,有效抑制非特异性扩增,可对宽广浓度范围的模板进行准确定量,获得稳定可靠的qPCR 结果。预混液中含有通用校正染料,与绝大多数 qPCR 设备兼容,包括需要 ROX 校正的仪器,实验过程中一般不需要额外添加校正染料。
使用方法
1. 使用注意
① 因Mix 中预混有染料,其保存或反应体系配制过程应避免强光照射;
② 使用前上下颠倒轻轻混匀Mix,请勿涡旋振荡混匀,避免产生过多气泡;
③ Mix 中含有Universal 校正染料,适用于所有机型,无需额外添加染料。
2. 建议的qPCR 反应体系
a. 通常推荐的引物终浓度为0.2 μM,反应效果不佳时可在0.1~1 μM 范围内进行调整;
b. 推荐模板加样量为1~2 μl,如模板类型为未稀释cDNA 原液,模板添加量不应超过总反应体系的10%。不同种类DNA 模板中含有的靶基因拷贝数目不同,必要时可进行梯度稀释,以确定最佳的DNA 模板添加量。
3. qPCR 反应程序(可根据机型适当调整)Universal SYBR Green qPCR Mix
两步法
三步法
a. 根据引物的Tm 值进行退火& 延伸(退火)温度的设定;若扩增片段在200bp 以内,退火& 延伸(延伸)时间可以设置为15 sec;此外,退火& 延伸(延伸)时间的设置还需根据您使用的qPCR 仪所需要的最短数据采集时间自行调整;
b. 不同qPCR 仪的熔解曲线采集程序有差别,一般可使用仪器默认的熔解曲线采集程序。
4. 实验优化
若使用默认反应条件反应性能不佳时,则需要进行反应条件的优化,可以从引物浓度以及扩增程序两个方面进行:
① 引物浓度调整
当引物终浓度在0.1~1.0 μM 范围之间变化时,引物浓度越低,扩增特异性越高,但扩增效率会有所下降。
② 扩增程序优化
需提高扩增特异性,可使用两步法程序或提高退火温度;需提高扩增效率,可使用三步法程序或延长延伸时间。
5. 引物设计原则
① 扩增产物长度建议控制在80~200 bp;
② 引物长度为18~25 bp;
③ 正向引物和反向引物的Tm 值相差不超过1℃为佳,Tm 值控制在58~62℃为佳;
④ 引物的GC 含量控制在40%~60% 之间;
⑤ 引物A、G、C、T 整体分布尽量要均匀,避开T/C 或者A/G 的连续结构(特别是3' 端);
⑥ 引物3' 端最后一个碱基最好为G 或者C;
⑦ 避开引物内部或者两条引物之间的互补序列;
⑧ 使用NCBI BLAST 功能检索确认引物的特异性。
美国Azaood公司成立于2004年,是一家开发和生产用于生命科学研究、诊断和生物技术应用的高质量纯化酶、蛋白质、核酸和细胞分离试剂盒、胎牛血清的lingdao者;Azood公司是通过了ISO9001认证的主要制造商,可以满足从研究到大规模批量生物加工和OEM应用与要求的公司。