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AC12L062 Caspase 1活细胞凋亡检测试剂盒(绿色)
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生产厂家公司前身为上海李记生物科技有限公司,成立于2015年。和元李记在2023年由和元生物和李记生物合资成立,是集研发、生产、销售为一体的国产生物试剂公司,专注于生命科学和生物技术领域,致力于为客户提供技术优秀 、方便易用、经济高效的产品,产品范围包括:细胞生物学、分子生物学、免疫学和生物化学相关的实验试剂及试剂盒。
目前在全国40余座城市均有授权代理;直接服务终端超千家,涵盖CRO、药企、高校、医院和科研院所;李记产品已帮助客户发表数百篇SCI,多篇CNS。
优势产品:蛋白Marker、EZ Trans细胞转染试剂、CCK-8、支原体快速检测试剂盒、核酸染料(GelRed/GelGreen)、EZ Protein any KD PAGE蛋白电泳试剂盒、荧光染料(Alexa Fluor 488, 555, 647,CY3, cy5)、胎牛血清、细胞凋亡检测试剂盒等。
产品描述
活细胞凋亡检测试剂盒基于半胱天冬酶的荧光抑制剂。这些抑制剂具有细胞渗透性和非细胞毒性。一旦进入细胞,半胱天冬酶抑制剂与活性半胱天冬酶共价结合。 Caspase-1主要参与促炎细胞因子的激活和细胞凋亡过程。已经证明胱天蛋白酶1对肽序列Tyr-Val-Ala-Asp(YVAD)具有底物选择性。该试剂盒使用FAM-YVAD-FMK作为半胱天冬酶1活性的荧光指示剂。 FAM-YVAD-FMK在凋亡细胞中不可逆地结合活化的半胱天冬酶1。一旦与半胱天冬酶1结合,荧光试剂保留在细胞内。结合抑制胱天蛋白酶1但不会阻止细胞凋亡的进行,有多种参数可用于监测细胞凋亡。
产品优势
这种试剂盒旨在通过测量活细胞中的caspase 1活化来检测细胞凋亡。它用于定量凋亡细胞中活化的半胱天冬酶1活性,或用于筛选半胱天冬酶1抑制剂。绿色标记试剂FAM-YVAD-FMK允许通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶1。该试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。
技术资料
1.Ex(nm):493
2.Em(nm):517
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
Caspase 1活细胞凋亡检测试剂盒(绿色) | AC12L062 | 25T | 4680 |
产品组分
组分 | 规格 |
A: FAM-YVAD-FMK | 1 vial |
B: Washing Buffer | 100 mL |
C: 500X Propidium Iodide | 100 µL |
D: 500X Hoechst Stain | 100 µL |
实验方案
1.用密度为5×105到2×106个细胞/ mL的测试化合物制备细胞。
2.将FAM-YVAD-FMK以1:150的比例加入到细胞溶液中。
3在室温下孵育1小时。
4.将细胞沉淀,用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞。
5.在Ex / Em = 490 / 525nm处分析细胞。
【注】:使用前将所有部件在室温下解冻。
操作步骤
1.根据您的特异性诱导方案,将细胞培养至适于细胞凋亡诱导的密度,但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时,对于每种标记条件,以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子:
(1)用2μg/ ml喜tree碱处理Jurkat细胞3小时。
(2)用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。
(3)用4μg/ ml喜tree碱处理HL-60细胞4小时。
(4)用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。
【注】:应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导细胞凋亡的合适细胞密度。
2.通过向FAM-YVAD-FMK(组分A)的小瓶中加入50μLDMSO制备150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液。
3.将150×FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液(来自步骤1)以1:150的比例添加到细胞溶液中,并将细胞在37℃,5%CO 2培养箱中孵育1小时。
【注1】:对于FAM-YVAD-FMK标记,细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。未使用的150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在 -20 ℃。
【注2】:对于粘附细胞,用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整,并在用FAM-YVAD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。
【注3】:适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。
4.将细胞以约200g旋转5分钟,并用1mL洗涤缓冲液(组分B)洗涤细胞两次。将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。
【注1】:FAM-YVAD-FMK是荧光的,因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。
【注2】:对于分离的细胞,应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样,用于步骤6。
5.如果需要,用DNA染色标记细胞(如用于死细胞的碘化丙锭,或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst)。
6.通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm处检测荧光强度(对于碘化丙锭,Ex / Em = 535/635 nm;对于Hoechst染料,Ex / Em = 350 / 461纳米)。
(1)对于流式细胞仪,使用FL1通道监测荧光强度(FL2通道用于碘化丙锭染色)。
(2)用于荧光显微镜和荧光酶标仪。将100μL细胞悬浮液置于96孔黑壁/微量滴定板透明底部的每个孔中。
【注】:如果需要平衡细胞浓度,调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失,则此调整步骤是可选的。
(3)使用FITC通道在荧光显微镜下观察细胞(用于碘化丙啶染色的TRITC通道,用于Hoechst染色的DAPI通道)。
(4)使用荧光酶标仪,使用Ex / Em = 490 / 525nm(在515nm处截止)底部读取模式监测荧光强度。
注意事项
该产品仅限于科学实验研究使用,不得用于临床诊断、治疗等领域。