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外泌体指标鉴定实验
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生产厂家上海达为科生物科技有限公司,位于上海长江软件园,公司目前具备较好的生物学、医学技术服务平台,能够为广大客户提供医学科研样本检测、合作研究、开发及生产服务。
公司拥有专业的实验室、先进的实验设备和经验丰富的科研技术人员。技术团队包括研究员(博士后)2人,助理研究员(博士)4人,核心研究员(硕士)15人,主要致力于基因组学、转录组学、蛋白质组学、代谢组学、生物化学、病理检测、基因检测等技术在科研中的应用与推广。通过高度细分、较好的服务平台,为广大客户提供了完善的技术解决方案和服务。目前,,涉及临床医学、肿瘤生物学、免疫学、细胞生物学、分子生物学等生命科学、医学等诸多领域。
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一、实验原理
所有培养的细胞类型均可分泌外泌体,且外泌体天然存在于体液中,包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。 有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的分子机制刚刚开始研究。 外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡,参与细胞间通讯,对外泌体的研究兴趣日益增长,无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。
外泌体(Exosome)主要检测指标为CD63、CD9、CD81、Tsg101、Alix、HSP70等,针对外泌体的定性检测,至少选择2-3个指标就能满足文章发表就可以。大部分文献中没有检测内参,个别文章中使用了Actin、GAPDH和Tubulin作为内参进行检测,外泌体中的Actin、GAPDH和Tubulin的表达丰度相对于正常细胞样品中的较低,可能会检测不到任何条带或者条带微弱。
二、实验流程
1. 外泌体BCA法定量。
2. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE)。
3. 蛋白质转移到PVDF膜。
4. 膜的封闭和抗体孵育。
5. 结果检测。